卵清白蛋白提取的.ppt

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1、卵清白蛋白提取的工藝組員：阮金麗劉碧嬌魏徐麗梁倩萍·蛋清中各種蛋白的理化性質(zhì)名稱比例分子量KDa等電點(diǎn)卵清蛋白52%454.5伴清蛋白13%786.6溶菌酶11%284.0-4.3卵類粘蛋白3.5%1410.7卵粘蛋白1.5%18(α)400(β)4.7免疫球蛋白<1.0%不同不同工藝流程分離蛋清離子交換層析脫鹽預(yù)處理收集，檢測(cè)材料和試劑新鮮雞蛋Q-SepharoseF.F凝膠G-25Tris-HCl(20mmol/L)HCl（1M）NaOH（1M）Tris-HCl(20mmol/L,pH8.0)NaCl（0.15M）儀器設(shè)備

2、離心機(jī)紫外檢測(cè)儀色譜柱分離蛋清將新鮮雞蛋洗干凈，敲碎蛋殼（大頭），小心分離出蛋清和蛋黃，取蛋清預(yù)處理1將蛋清緩慢攪拌（以不引起泡沫為準(zhǔn)）至膠狀部分破壞用蛋清兩倍體積的20mmol/LTris-HCl稀釋（取樣SDS-PAGE測(cè)蛋白含量）2用1mol/L的HCl調(diào)pH至6.0，在2℃條件下緩慢攪拌3h，以沉淀伴清蛋白3在4℃、轉(zhuǎn)速為6000r/min條件下，離心5分鐘去除沉淀；4上清液用1mol/LNaOH調(diào)整到pH8.0，在4℃，轉(zhuǎn)速15000r/min條件下，離心30min，沉淀卵黏蛋白，取上清液備用。離子交換Q-Sepha

3、roseF.F陰離子柱分離1溶脹在體積分?jǐn)?shù)為20%乙醇中的強(qiáng)陰離子填料Q-SepharoseFF攪勻，取所需量，靜置2用pH8.0的20mmol/L的Tris-HCL起始緩沖液置換20%的乙醇溶液3-5次，最終緩沖液與膠體的體積比為1：3備用。3將Q-SepharoseFF裝入色譜柱中，最終體積為40mL。用20mmol/LTris-HCL（pH8.0）平衡色譜柱上樣將蛋清制備液以3mL/min加入Q-SepharoseFF色譜柱中待吸附飽和后，用20mmol/LTris-HCL（pH8.0）緩沖液沖洗未結(jié)合到Q-Sephar

4、oseFF色譜柱上的蛋白，直到記錄儀記錄線回到基線7洗脫用含0.15mol/LNaCL的20mmol/LTris-HCL（pH8.0）進(jìn)行洗脫，收集各洗脫液脫鹽凝膠柱層析脫鹽稱取凝膠G-2530g，用0.02mol/L的PBS（pH8.0）500mL熱溶脹2h平衡用0.02mol/LPBS（pH8.0）40mL倒進(jìn)柱，排氣泡3裝柱待PBS流出20-30min后4上樣上樣量為床體積的30%洗脫用0.02mol/LPBS（pH8.0）控制速度，保證凝膠上方液面高度為10㎝6收集洗脫液收集，檢測(cè)收集洗脫液SDS-PAGE檢測(cè)卵清白蛋

5、白的純度自己好好看一下，一定要弄清楚每一步的作用，要思考！SDS-PAGE的操作步驟以及所用溶液的配制方法自己找哦。用到層析技術(shù)的，裝好柱后如何測(cè)柱效？結(jié)合分離或者儀器分析的課本即可找到相應(yīng)的資料。加油哦！里面有些參數(shù)不一定都是正確的。謝謝