煙草瞬時表達.doc

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1、MES溶液10mmolMES,10mmolMgCl2,調(diào)整PH值到5.8乙酰丁香酮0.1mmol/l取0.018g用DMSO溶解1.準備好12-15天的煙草(本生煙),2.培養(yǎng)農(nóng)桿菌200rpm28c12-16h3.離心收集菌塊2ml3000g3min4.加500ulMES重懸菌塊避光室溫(25C)靜置3-4h5.取20ul+180ulMES測OD600值6.加MES稀釋到OD600濃度為1(加1‰乙酰丁香酮)7.利用注射器將稀釋液注射到嫩葉內(nèi),使葉體浸潤整塊葉片8.浸潤后48h-72h用激光共聚焦顯微鏡觀察9.如需要DAPi染色細胞核,用10nm的dapi

2、稀釋1000倍,注射到煙草細胞內(nèi),避光培養(yǎng)3-4小時后用激光共聚焦顯微鏡觀察

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