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1、一、杏鮑菇(pleurotuseryngii)冷藏保鮮技術及自溶機理研究（鞏晉龍2013福建農林大學）細胞壁物質成分(蛋白質、可溶性糖、幾丁質、纖維素)的測定(1)細胞壁乙醇不容物(AIS)的制備：參照ZivanovicSetal.等[144]方法并做一些修改：取混勻后的樣品組織200g于95%的乙醇溶液中浸提10min，然后煮沸5min，放置于室溫下沉淀過夜，過濾，殘渣用78%乙醇進行洗滌，過濾后60℃真空干燥過夜，置于干燥器中冷卻至室溫，干樣經粉碎后過篩，即得乙醇不容物(AIS)。(2)細胞壁物質成分的測定：乙醇不容物(AIS)中可溶性蛋白質含量的測定參照考馬斯亮藍染色法[117]
2、，以標準牛血清蛋白溶液制作標準曲線。精確稱取25mgAIS，加蒸餾水，浸提10min，12000×g離心20min，吸取1.0mL上清液于10mL容量瓶并定容至刻度。吸取1.0mL樣品提取液，放入具塞試管中，加入5.0mL考馬斯亮藍G-250溶液，充分混合，放置2min后在波長595nm處比色測定其吸光度，重復3次，計算可溶性蛋白質的含量。乙醇不容物(AIS)中可溶性糖含量的測定采用苯酚-硫酸法[117]以標準蔗糖溶液制作標準曲線。精確稱取25mgAIS于20mL具塞試管中，加入10mL蒸餾水，薄膜封口，沸水中煮沸提取30min，冷卻、過濾，將殘渣回收到試管中，加10mL蒸餾水，重復沸
3、水浴提取10min，過濾，洗滌，將濾液一并轉入50mL容量瓶并定容至刻度。吸取1.0mL提取液于具塞試管中，加入1.0mL蒸餾水，1.0mL0.09g/mL苯酚溶液，搖勻，再加入5.0mL的濃硫酸，充分振蕩后在室溫下反應30min，在波長485nm處比色測定其吸光度，重復3次，計算可溶性糖的含量。乙醇不容物(AIS)中幾丁質的測定方法參照傅海艦等[145]，以標準D-氨基葡萄糖鹽酸鹽溶液制作標準曲線。精確稱取25mg于25mL容量瓶中，加入5mL2mol/L鹽酸溶液溶脹，混勻后，冰水浴中加入15mL濃硫酸，沸水中煮沸30min，冷卻至室溫，去離子水定容至刻度。吸取水解液1mL與10mL
4、容量瓶中，依次加入1.0mL2%間苯二酚水溶液、7.5mL75%濃硫酸溶液，混勻，沸水浴加熱30min，涼水沖至室溫，定容，以空白作對照，在500nm處比色測定其吸光度，重復3次，計算幾丁質含量。乙醇不容物(AIS)中纖維素含量的測定方法參照寧正祥等[146]以標準葡萄糖溶液制作標準曲線。精確稱取0.5gAIS與燒瓶內，加入120mL2%鹽酸溶液，回流煮沸3h，抽濾，用熱水洗滌2~3次，抽干，再用乙醇和乙醚洗滌1次，低溫烘干。用20mL80%硫酸溶液將其轉移到錐形瓶內，搖勻，放置2h，加入300mL蒸餾水，置于沸水浴中加熱5h，冷卻，過濾至500mL容量瓶并用蒸餾水定容至刻度。取0.5
5、mL樣品提取液加入25mL具塞刻度試管中，加1.5mL蒸餾水、0.5mL蒽酮-乙酸乙酯試劑和5.0mL濃硫酸，充分振蕩，沸水浴加熱1min，冷卻至室溫，在630nm處比色測定其吸光度，重復3次，計算纖維素含量。二、主要食用菌采后品質劣變機理及調控技術研究（姜天甲2010浙大）1細胞壁乙醇不溶物(alcohol-insolubleresidue,AIR)的提取乙醇不溶物(AIS)的制備參照Zivanovicetal.(2000)等的方法。細胞壁各組分抽提參照Sietsmaetal.(1981)的方法并做了些修改:取20omgAIS,用煮沸的蒸餾水15mL抽提Zh,提取溶液在4oc經130
6、00只g離心20min,收集上清液并定容至25mL得水溶性組分;取水不溶性沉淀,以IMNaoH溶液15mL在60OC下抽提20min,旋轉離心,收集上清液并用冰醋酸將PH值調至7.0,定容至25mL得IMNaOH可溶性組分;取IMNaOH不溶殘渣,以10MNaOH溶液15mL煮沸并抽提111,旋轉離心,收集上清液并用冰醋酸將PH值調至7.0,定容至25mL得IOMNaOH可溶性組分;取IOMNaOH不溶殘渣,以6MHel溶液smL煮沸并抽提4h,旋轉離心后收集上清液,殘渣用IMNaOH溶液10mL在60oC下抽提20mill,旋轉離心并收集上清液,將這兩部分上清液合并然后用水定容至25
7、mL得HCI/IMNa0H可溶性組分;剩余不溶物為殘渣組分。2細胞壁物質成分的分離和測定乙醇不溶物(AIS),水溶性組分與1MNaoH可溶性組分中的可溶性蛋白含量參照Bradford(1976)的方法進行測定,以牛血清白蛋白制作標準曲線。吸取提取液一lmL于試管中,然后加入smL考瑪斯亮藍G一250試劑,混合均勻,放置5min后在595nm下比色測定吸光度,計算可溶性蛋白含量。乙醇不溶物(A工S)與所有組分中的可溶性糖含量測定采用蔥酮比色法(曹
