不同實(shí)驗(yàn)中transwell小室的選擇和使用.doc

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1、不同實(shí)驗(yàn)中transwell小室的選擇和使用Transwell小室在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中很常用，共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、趨化實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲以及藥物轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)都會(huì)用到，但小室的規(guī)格有很多種，不同的實(shí)驗(yàn)需要用到的小室規(guī)格也不同。根據(jù)transwell板的不同，transwell小室可以分為6孔板小室、12孔板小室和24孔板小室以及和transwell皿配套的75mm直徑的小室；根據(jù)孔徑的不同，從小孔徑到大孔徑又分為0.4μm規(guī)格、3μm規(guī)格、5μm規(guī)格、8μm規(guī)格，不同實(shí)驗(yàn)對(duì)小室孔徑的要求也不一樣。?小于3μm孔徑的小室，細(xì)胞不會(huì)遷移通過，研究不涉及細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力，

2、不需要細(xì)胞穿過聚碳酸酯膜，應(yīng)該選擇3μm以下的孔徑。例如共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)和caco-2細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)模型實(shí)驗(yàn)。共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)：常用0.4、34μm，將細(xì)胞A種于上室，細(xì)胞B種于下室，可以研究細(xì)胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對(duì)細(xì)胞A的影響。?caco-2細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)模型：選用0.44μm膜，將Caco-2細(xì)胞以約l×10個(gè)/mL，每孔0.5mL的密度接種在Transwell內(nèi)培養(yǎng)21d左右，前1周隔天換液，1周后每天換液。在模型建立的同時(shí)對(duì)其跨膜電阻值及堿性磷酸酶活性進(jìn)行監(jiān)測(cè)來判斷模型是否達(dá)到轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)要求。?涉及到細(xì)胞遷移的實(shí)驗(yàn)：要用5.0、8.0、12.0μm的小室，這樣

3、上室細(xì)胞可穿過聚碳酸酯膜進(jìn)入下室，計(jì)數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反映細(xì)胞的趨化能力、遷移能力和侵襲能力。?趨化性實(shí)驗(yàn)：細(xì)胞B對(duì)細(xì)胞A的趨化作用，將細(xì)胞A種于上室，細(xì)胞B種于下室，可以研究細(xì)胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對(duì)細(xì)胞A的趨化作用；趨化因子對(duì)細(xì)胞的趨化作用，將細(xì)胞種于上室，下室加入某種趨化因子，可研究該趨化因子對(duì)細(xì)胞的趨化作用。?細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)：常用8.0、12.0μm膜，上室種細(xì)胞，下室加入FBS或某些特定的趨化因子，細(xì)胞會(huì)向營(yíng)養(yǎng)成分高的下室跑，計(jì)數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反映細(xì)胞的遷移能力。?細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)：常用8.0、12.0μm膜，原理與細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)類似。

4、上室種細(xì)胞，下室加入FBS或某些特定的趨化因子，細(xì)胞會(huì)向營(yíng)養(yǎng)成分高的下室跑，但與細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)不同的是，聚碳酸酯膜上室側(cè)鋪上一層基質(zhì)膠，用以模仿體內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)，細(xì)胞欲進(jìn)入下室，先要分泌基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）將基質(zhì)膠降解，方可通過聚碳酸酯膜。計(jì)數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反映細(xì)胞的侵襲能力。