檢定菌保存、傳代、使用、銷毀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程完整.doc

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1、.....檢定菌保存、傳代、使用、銷毀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1.目的:規(guī)范藥品微生物學(xué)檢定用菌的管理,最大限度降低變異率,確保菌種的溯源性與穩(wěn)定性,從而確保微生物學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。2.依據(jù):ChP2010版(一部)、《中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》(2010年版)。3.范圍:本規(guī)程適用于檢定用菌種的管理,包括菌種的申購(gòu)、保存、傳代、使用及銷毀等。4.責(zé)任:4.1.QC主管負(fù)責(zé)菌種的申購(gòu)、接受、保存、分發(fā)。4.2.微生物檢驗(yàn)員負(fù)責(zé)菌種的確認(rèn)、傳代、使用及銷毀。5.相關(guān)文件及術(shù)語:5.1.術(shù)語標(biāo)準(zhǔn)菌種是指由中國(guó)藥品生物制品檢定所醫(yī)學(xué)微生物

2、菌種保藏管理中心提供的冷凍干燥菌。傳代用菌種是指用標(biāo)準(zhǔn)菌種制備的采用特定保存方法長(zhǎng)期固定保存的菌種,用于傳代及制備工作用菌種。工作用菌種是指用標(biāo)準(zhǔn)菌種或傳代用菌種接種至普通瓊脂斜面培養(yǎng)后,作為日常工作使用的菌種。菌種的代是指將其接種至一新鮮培養(yǎng)基上或培養(yǎng)基內(nèi),每萌發(fā)一次即稱為一代,從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代。6.標(biāo)準(zhǔn):.專業(yè)word可編輯......6.1.檢定菌的申購(gòu)QC主管每年根據(jù)檢定菌種的使用情況(包括臨時(shí)檢驗(yàn)需要),提出購(gòu)買計(jì)劃,交由質(zhì)量管理部部長(zhǎng)審批后,向中檢所菌種保藏中心或?。ㄊ校┧帣z所購(gòu)買凍干菌種

3、(標(biāo)準(zhǔn)菌種);也可以直接向?。ㄊ校┧帣z所購(gòu)買傳代用菌種,購(gòu)買時(shí),需詢問與確定菌種的代數(shù),以便傳代時(shí)控制代數(shù)。6.2.檢定菌的接收菌種到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后,由QC主管接收菌種,檢查其名稱和數(shù)量,以及每一支的完整性,同時(shí)將菌種的所有信息,填寫在《檢定菌接收記錄》(附表1)上,內(nèi)容包括:名稱、數(shù)量、編號(hào)(無編號(hào)者按檢定菌種的編號(hào)原則編號(hào))、代數(shù)、來源、接收日期、接收人等,并將其暫貯存于4~8℃冰箱中,在一周內(nèi)必須完成轉(zhuǎn)種。6.3.檢定菌的保存6.3.1.工作用菌種的保存工作用菌種采用斜面低溫保存法。將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上,待菌

4、生長(zhǎng)充分以后,轉(zhuǎn)移至4~8℃冰箱中保存。此法僅用于工作用菌種的短期保存,并應(yīng)隨時(shí)檢查其污染雜菌和變異等情況,發(fā)現(xiàn)異常情況,經(jīng)應(yīng)滅活處理后銷毀。保存時(shí)間根據(jù)菌種種類而不同,細(xì)菌:1個(gè)月;酵母菌:2個(gè)月;霉菌及芽胞:3個(gè)月。6.3.2.傳代用菌種的保存采用甘油冷凍管保藏法或液體石蠟保存法。6.3.2.1.甘油冷凍管保存法.專業(yè)word可編輯......用無菌接種環(huán)輕輕刮取經(jīng)冷凍復(fù)溶增菌后并接種至平板或瓊脂斜面的菌苔,并通過接種環(huán)與試管壁之間的輕輕摩擦而使細(xì)菌充分?jǐn)U散到預(yù)先裝入試管中的無菌純化水中,調(diào)整菌液濃度,使其等同于10號(hào)比

5、濁管,向已制備好的菌懸液中加入等體積的無菌甘油(濃度20%),即為10%甘油菌懸液,輕輕振搖,使內(nèi)容物充分混合,分裝于無菌小試管,在-30℃冷凍條件下保存。此甘油冷凍管為第2代(G2)??梢悦扛?年轉(zhuǎn)種一代。使用時(shí),取出一支放至室溫,轉(zhuǎn)種增菌培養(yǎng)或接種至瓊脂斜面復(fù)蘇,挑取純菌落傳代或工作用。此種方法主要適用于需氧細(xì)菌和酵母菌的保藏(如大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型副傷寒沙門菌)。6.3.2.2.液體石蠟保存法6.3.2.2.1.無菌液體石蠟的制備:選用優(yōu)質(zhì)化學(xué)純液體石蠟,將液體石蠟分裝加塞,用牛皮紙包好,在121℃滅菌30

6、分鐘,置40℃恒溫箱中蒸發(fā)水分,經(jīng)無菌檢查后備用。6.3.2.2.2.液體石蠟管的制備:將菌種穿刺接種于半固體高層培養(yǎng)基中,在適宜條件下培養(yǎng)結(jié)束后,在層流臺(tái)下用無菌吸管吸取上述無菌液體石蠟至培養(yǎng)好的菌種管內(nèi),并使石蠟高出菌種表面約1cm使菌體與空氣隔絕,并將試管直立,置于-20℃冷凍或2~8℃冰箱中保存。此法主要適用于霉菌、厭氧菌、放線菌、芽孢桿菌的保存(如枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉菌等)。6.3.3.各菌種的保存方法、條件及期限,見《傳代用菌種保存方法、保存溫度、保存期限》(附件1)。.專業(yè)word可編輯......

7、6.4.檢定菌的傳代檢定菌菌種的傳代因凍干菌(標(biāo)準(zhǔn)菌種)與傳代用菌種而不完全相同。6.4.1.標(biāo)準(zhǔn)菌種的復(fù)蘇、確認(rèn)、傳代6.4.1.1.標(biāo)準(zhǔn)菌種的復(fù)蘇6.4.1.1.1.把凍干菌種管、滅菌毛細(xì)滴管(1ml)、雙碟、鑷子、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(或其它適宜培養(yǎng)基)數(shù)支,移入接種室或超凈工作臺(tái)。6.4.1.1.2.將凍干菌種管外壁用碘酒擦洗消毒,稍干,用75%乙醇棉擦凈,放在滅菌雙碟內(nèi),待干。點(diǎn)燃酒精燈,將標(biāo)準(zhǔn)菌種管的封口一端在火焰上,燒灼紅熱,用滅菌毛細(xì)滴管吸取營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(或其它適宜的培養(yǎng)基),滴在灼熱的菌種管封口一端,使驟冷而炸

8、裂。6.4.1.1.3.取滅菌鑷子,在火焰旁,將炸裂的管口打開,放入滅菌雙碟內(nèi),另取1支滅菌毛細(xì)滴管,在火焰旁吸取營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(或其它適宜的培養(yǎng)基)少許,加至菌種管底部,將凍干菌塊攪動(dòng)促使溶解,隨即吸出管內(nèi)菌液,接種至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(或其它適宜的培養(yǎng)基)內(nèi),并根據(jù)不同菌種類型而將其培養(yǎng)于

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