轉堿蓬脫水素基因煙草的鑒定和功能分析.pdf

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1、／家讀義嗦乂４巧女＃隹俗ｉ；■‘轉堿蓬脫水素基因煙草的鑒定和功能分析研究生：孫樣指導教師：馬慧副教授專業(yè)名稱：物學：細胸斗研究方向：細胞分子生物學＇？所在學院＂：生物科學技術學院＼，‘＇■■■．－、＊，＇．．．＊■，２０１６年６月ｒｔ’ＤｉｓｓｅａｔｉｏｎｆｏｒＭａｓｋｒｓｄｅｒｅｅｇＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｔｏｂａｃｃｏｏｆＳｕａｅｄａｓ

2、ａｌｓａＤｅｈｙｄｒｉｎＧｅｎｅＣａｎｄｉｄａｔｅ：ＳｕｎＭｅｎｇＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ａｓｓｏ．Ｐｒｏｆ．ＨｕｉＭａＳｐｅｃｉａｌｉｔｙ：ＣｅｌｌｕａｒＢｉｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈＦｉｅｌｄ：ＭｏｌｅｃｕｌａｒｅｘｏｂｉｏｌｏｇｙＣｏｌｌｅｇｅ：ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＳｈｅｎａｎｇＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｇｙＪｕｎｅ２０１６獨創(chuàng)性聲明本人盧明所吊交的論文是我個人在導師指導下進巧的硏究作及取得的硏究成果，

3、。盡巧所知レ：除了文中特別加ｕ樂注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得沈ｍ農業(yè)人巧誠其它教育機構的學位或證書而使ＭＬ一］Ｊ過的材料。ｊ我同；作的同忠對本研究所做的任何貢獻均已化論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名時間；０亦／娘＇導師簽名：Ｉ％■時間；＞／年知／／日關于論文知識產權和使用授權的說明本論文的知識產權為沈陽化業(yè)乂學所有。本人完全了解沈阿Ｉ農業(yè)人學巧關保留、使Ｗ學化論文的規(guī)定，即：巧校巧權保留送交論文的復印件和磁盤，允許論文被巧閱和巧閱，可Ｗ采Ｗ影印、縮印

4、誠掃描巧復制手段保存、匯編學位論文。同意沈陽農業(yè)人巧可ＷＷ不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的內巧。巧份論文中的所巧內巧不經沈間（農業(yè)人學授權不得Ｗ任何方式擅白對外發(fā)表。（保密的學位論文在解密后應遵守此協(xié)議）：時間：年／研究生簽名（月之曰才衫睽＾導師簽名：時間：〇年／月曰＞、（沈巧Ｉ農業(yè)乂學碩＋巧位論文目錄ｍ＾１Ａｂｓｔｒａｃｔ２第一章文獻綜述４１．１堿蓬概述４１．２脫水素概述５１．２．１脫水素的結構和類型５１．２．２脫水素的分布與表達６１．２．３脫水素的功能

5、６１．３功能研究方法９１１．３．基因水平研究方法９１．ＲＮＡ水．３２平研究方法１１１．３．２蛋白質水平研究方法１２１．４本研究意義１３二第章轉脫水素基因煙草在分子水平上的鑒定１５１２．１試驗材料與試劑５２丄１試驗材料１５２丄２試驗試劑１５２丄３試驗儀器及設備１８２．２試驗方法１８２．１．２轉基因煙草的種植１８２２．２陽性菌株質粒的提?。保梗崳姡墸玻玻常墸校茫液Y選陽性轉基因植株２０２４ｏｕｔｈｅｏｔ．２．Ｓｒｎｂｌ驗證２１２．３結果與分析２５２

6、１．３．陽性質粒的提取及鑒定２５２．３ＰＣＲ篩選陽性轉基．２因植株２６２７２．３．３Ｓｏｕｔｈｅｍｂｌｏｔ驗證２．４２９２．５結論３０第Ｈ章轉脫水素基因煙草在蛋白表達水平上的鑒定３１３１．１試驗材料與試劑３３１３丄１試驗材料３丄２試驗試劑３１１０＾＿３丄３試驗儀器及設備３４３．２試驗；３４３．２．１轉基因煙草總蛋白提取３４３２．２．蛋白質定量３４３８ｂ－ｓＤ．２．３ｐＥＴ２ＳＨＮ在大腸桿菌中的誘導表達３５３ＤＳ－ＰＡＧＥ．２．４聚丙婦醜氨凝膠電

7、泳（Ｓ）３５３．２．５Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ驗證３６．３３結果與分析巧３．３．１蛋白質定量結果３７３ＤＳ－．３．２ＳＰＡＧＥ電泳圖３８３．３．３Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ圖３９３．４艦３９３４０．５結論第四章轉基因煙草抗逆生理功能分析４１４．１試驗材料與試劑４１４丄１試驗材料４１４丄２試驗試齊［４１］４．２．３試驗儀器及設各４２４．２試驗方法４３４．２．１材料的處理４３４．２．２相對電導率的測定４３４．２．３丙二醒含量的測定４３４．

8、２．４超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性的測定４４４５．２．５游離脯氨酸含量的測定４４２．６４６．數(shù)據(jù)分析４．