PCR實(shí)驗(yàn)室要求和基本設(shè)備.doc

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1、PCR實(shí)驗(yàn)室的基本設(shè)備與要求一、?臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置原則（一）?臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置原則?1、?試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)?2、?標(biāo)本制備區(qū)?3、?擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)?4、?擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)?如使用全自動(dòng)分析儀，區(qū)域可適當(dāng)合并。?（二）?各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。?（三）?進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行即試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)?—>標(biāo)本制備區(qū)—>擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)—>擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。?（四）?不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏色）。工作人員離開各工作區(qū)域時(shí)，不得將工作

2、服帶出。?二、?工作區(qū)域儀器設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn)?（一）?試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)?1、2-8C和-15C冰箱?2、混勻器?3、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）?4、移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）?5、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）?6、專用工作服和工作鞋?7、專用辦公用品?（二）?標(biāo)本制備區(qū)?1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱?2、高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)?3、混允器?4、水浴箱或加熱模塊?5、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）?6、可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）?7、超凈工作臺(tái)?8、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐

3、高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）?9、專用工作服和工作鞋?10、專用辦公用品?，如需處理大分子DNA，應(yīng)具有超聲波水浴儀。?（三）?擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)?1、?核酸擴(kuò)增儀?2、?微量加樣器（覆蓋1-1000ul）?3、?可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）?4、?消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）?5、?專用工作服和工作鞋?6、?專用辦公用品?(四)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)視檢驗(yàn)方法不同而定，基本儀器設(shè)備如下：?1、?微量加樣器（覆蓋1-1000ul）?2、?可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）?3、?消耗品：一次性手套

4、、一次性吸水紙、加樣器吸頭（帶濾心）?4、?專用工作服和工作鞋?5、?專用辦公用品臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范化設(shè)置及其管理(一)試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)??下述操作在該區(qū)進(jìn)行：貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。?貯存試劑和用于標(biāo)本制備的材料應(yīng)直接運(yùn)送至試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)，不能經(jīng)過產(chǎn)物分析區(qū)。在打開含有反應(yīng)混合液的離心管或試管前，應(yīng)將其快速離心數(shù)秒。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。當(dāng)貯存試劑溶液經(jīng)檢查可用后，應(yīng)將其分裝貯存?zhèn)溆?，避免由于?jīng)常打開反應(yīng)管吸液而造成污染。?含反應(yīng)混合液的離心管或試管在冰凍前都應(yīng)快速離

5、心數(shù)秒。大多數(shù)用于擴(kuò)增的試劑都應(yīng)冰凍貯存。為避免因單次反應(yīng)取液而頻繁的凍融主貯存試劑，應(yīng)分裝冰凍貯存試劑溶液。貯存試劑的分裝體積根據(jù)通常在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)一次測定所需的擴(kuò)增反應(yīng)數(shù)來決定。?主反應(yīng)混合液的組成成份尤其是聚合酶的適用性和穩(wěn)定性通過預(yù)試驗(yàn)來檢查，評價(jià)結(jié)果必須有書面報(bào)告。對于"熱啟動(dòng)"技術(shù)(在第一個(gè)高溫變性步驟后加入酶)，聚合酶也可不包含在主反應(yīng)混合液中。?在整個(gè)本區(qū)的實(shí)驗(yàn)操作過程中，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換。此外，操作中使用一次性帽子也是一個(gè)有效地防止污染的措施。?嚴(yán)禁用嘴吸取液體，加樣器和吸頭等必須經(jīng)高壓處理。?工作結(jié)束后必須立即對工

6、作區(qū)進(jìn)行清潔。本工作區(qū)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)表面應(yīng)可耐受諸如次氯酸鈉的化學(xué)物質(zhì)的消毒清潔作用。實(shí)驗(yàn)臺(tái)表面的紫外照射應(yīng)方便有效。由于紫外照射的距離和能量對去污染的效果非常關(guān)鍵，因此可使用可移動(dòng)紫外燈(254nm波長)，在工作完成后調(diào)至實(shí)驗(yàn)臺(tái)上60~90cm內(nèi)照射。由于擴(kuò)增產(chǎn)物僅幾百bp，對紫外線損傷不敏感，因此紫外照射擴(kuò)增片段必須延長照射時(shí)間，最好是照射過夜。實(shí)驗(yàn)室及其設(shè)備的使用必須有日常記錄。(二)標(biāo)本制備區(qū)??下述操作在該區(qū)進(jìn)行：臨床標(biāo)本的保存，核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定RNA時(shí)cDNA的合成。?要正確使用加樣器。由于在加

7、樣操作中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)?？赏ㄟ^在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污染，加入待測核酸后，必須蓋好含反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。對具有潛在傳染危險(xiǎn)性的材料，必須有明確的樣本處理和滅活程序。?用過的加樣器吸頭必須放入專門的消毒(例如含次氯酸鈉溶液)容器內(nèi)。實(shí)驗(yàn)室桌椅表面每次工作后都要清潔，實(shí)驗(yàn)材料(原始血標(biāo)本、血清標(biāo)本、提取中的標(biāo)本與試劑的混合液等)如出現(xiàn)外濺，則必須分別處理并作出記錄。?對實(shí)驗(yàn)臺(tái)適當(dāng)?shù)淖贤庹丈?254nm波長，與工作臺(tái)面近距離)適合于滅活去污染?？梢苿?dòng)紫外線

8、管燈可用來確保工作后對實(shí)驗(yàn)臺(tái)面的充分照射。?樣本處理對核酸擴(kuò)增有很大影響，必須使用有效的核酸提取方法，可在開展臨床標(biāo)本檢測前對提取方法進(jìn)行評價(jià)。?用于RNA擴(kuò)增檢測