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《三氧化二砷對乳腺癌細(xì)胞株抑制作用及其機(jī)制探析.doc》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、三氧化二碑對乳腺癌細(xì)胞株抑制作用及其機(jī)制探析作者單位：056105河北省冀中能源邯鄲礦業(yè)集團(tuán)總醫(yī)院（趙振江）；邯鄲市中心醫(yī)院（李海新）通訊作者：趙振江【摘要】目的探討三氧化二碑（arsenousoxide,As203）對乳腺癌MCF-7細(xì)胞的抑制作用及其機(jī)制。方法對乳腺癌MCF-7細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)傳代oAs203作用于細(xì)胞一定時間后利用流式細(xì)胞儀檢測乳腺癌細(xì)胞凋亡率；逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測survivin基因的表達(dá)；電鏡觀察乳腺癌細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果As203對乳腺癌細(xì)胞的抑制作用是以促進(jìn)細(xì)胞凋亡為主；凋亡抑制因子surviv
2、in基因在乳腺癌細(xì)胞中表達(dá)；乳腺癌細(xì)胞經(jīng)As203作用后，能抑制survivin基因的表達(dá)。結(jié)論As203可能通過抑制凋亡抑制因子survivin基因的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，從而發(fā)揮抗腫瘤的作用?！娟P(guān)鍵詞】三氧化二碑；細(xì)胞凋亡；癌基因本實(shí)驗(yàn)以MCF-7乳腺癌細(xì)胞為靶細(xì)胞，觀察As203對MCF-7細(xì)胞的生長抑制作用。1材料與方法1.1細(xì)胞培養(yǎng)及給藥方法乳腺癌MCF-7細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)進(jìn)入對數(shù)生長期時，以一定濃度接種于培養(yǎng)板中，貼壁后給藥,三氧化二碑組選用0.5ug/mK1.0ug/ml,2.0ug/ml三種濃度，在給藥48h后，分別對誘導(dǎo)MCF-7
3、細(xì)胞凋亡狀況進(jìn)行檢測。生理鹽水作為陰性對照組，1.0ug/mlDDP作為陽性對照組。1.2流式細(xì)胞儀檢測乳腺癌細(xì)胞凋亡率收集各As203組細(xì)胞1X107個,1000Xg離心5min,細(xì)胞沉淀用PBS洗1次，分散成單細(xì)胞懸液，加入70%冷乙醇4°C固定過夜。1000Xg離心5min,棄去上清液，用少量PBS重懸細(xì)胞，加入碘化丙噪PI,終濃度為50ug/ml,混勻，41放置lh,在流式細(xì)胞儀上檢測細(xì)胞凋亡率。1.3透射電子顯微鏡觀察透射電鏡下腫瘤細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察收集培養(yǎng)細(xì)胞，用PBS洗2次，2.5%戊二醛4乜固定，1%餓酸后固定30min,梯度
4、酒精脫水，樹脂包埋，超薄切片，鉛鈾染色透射電鏡觀察，拍照。1.4RT-PCR檢測survivin基因的表達(dá)在MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)加入As2O3(1.5ml/well),細(xì)胞100%病變后消化收集各組細(xì)胞，采用TRIZ0L法提取總RNA,用DNA/RNA測定儀測定RNA的濃度和純度。常規(guī)方法進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。PCR反應(yīng)條件為：94°C預(yù)變性5min,94°C30s,56°C退火30s,72°C延伸45s,30個循環(huán)oSurvivin引物序列上游：5'-TCTCAAGGACCACCGCATCT-3'；下游：5'-GACAGAAAGGAAAGCGCA
5、ACC-3,,擴(kuò)增產(chǎn)物為229bp；3-actin±游：5'-TCCTCCCTGGAGAAGAGCTA-3'；下游：5'-TCAGGAGGAGCAATGATCTTG-3',擴(kuò)增產(chǎn)物為302bpoPCR產(chǎn)物經(jīng)8%聚丙烯酰氨凝膠電泳，漠化乙錠（EB）顯色,Bio-profif凝膠圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行攝像分析。通過survivin/B-actin的灰度比值作相對定量。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)分析應(yīng)用SPSS12.0軟件處理，計(jì)量資料以均值土標(biāo)準(zhǔn)差（x土s）表示，使用t檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1流式細(xì)胞術(shù)分析實(shí)驗(yàn)組的腫瘤細(xì)胞均可見有G1前期細(xì)胞形成的凋亡峰，陰性對
6、照組對照組（1A）、0.5ug/ml組（1B）、1.0ug/ml組（1C）、2.0ug/ml組（1D）凋亡率分別為5.4%、21.9%、26.4%、36.9%。見圖1。2.2透射電鏡下腫瘤細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變?nèi)趸?Ug/ml）時透射電鏡下見細(xì)胞質(zhì)濃縮，核碎裂，染色質(zhì)濃縮于核膜（圖2）。2.3As203誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡時survivin基因表達(dá)的變化從圖3可知，survivin基因在乳腺癌細(xì)胞中存在髙表達(dá)。RT-PCR結(jié)果顯示，As203誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡時，survivin基因的mRNA受到抑制。對照組Survivingene/B-a
7、ctin為（0.502±0.174）,陽性對照組為（0.407±0.134）,1.0ug/mlAs203組為（0.392±0.105）,DDP組和1.0TMAs203組分別與細(xì)胞對照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P
