資源描述：
《三氧化二砷誘導(dǎo)白血病細(xì)胞株自噬性死亡及其分子機(jī)制的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、聲竹歹，．六：妒壩t學(xué)位論文三氧化二砷誘導(dǎo)白血病細(xì)胞株自噬性死亡及其分子機(jī)制研究浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院內(nèi)科學(xué)(血液病)2003級(jí)碩士研究生劉俊青導(dǎo)師錢文斌主任醫(yī)師摘要國內(nèi)外臨床研究已經(jīng)證實(shí)三氧化二砷(Arsenictrioxide，As2C．，)可有效地治療復(fù)發(fā)和／或初發(fā)的急性早幼粒細(xì)胞白血病(AcutePromyelocyticLeukemia，APL)，并能達(dá)到完全緩解。由于As203和化療藥物作用的靶點(diǎn)不同，臨床應(yīng)用時(shí)亦沒有明顯的骨髓抑制；且沒有化療藥物的其他嚴(yán)重毒副反應(yīng)。因此，國內(nèi)外研究人員試圖將As203應(yīng)用于其他惡性腫瘤的治療。在血液腫瘤方面，許多體外實(shí)驗(yàn)研究表明：As203
2、可誘導(dǎo)髓系、淋巴系和漿細(xì)胞等惡性血液病細(xì)胞株凋亡。在臨床研究方面，As203已經(jīng)進(jìn)入治療慢性粒細(xì)胞性白血病、急性粒細(xì)胞性白血病、多發(fā)性骨髓瘤和骨髓增生異常綜合征(MDS)等疾病的臨床I期和II期研究。但是As203治療淋巴細(xì)胞白血病的研究報(bào)道尚少，其對(duì)淋巴細(xì)胞惡性腫瘤和MDS的作用機(jī)制尚不清楚。本研究采用MTT(3一(4，5一dimethylthiazol一2一y1)一2，5-diphenyltelra—zoliumbromide)比色法觀察As203對(duì)T細(xì)胞白血病細(xì)胞株Molt．4和MDS細(xì)胞株Mutz．1細(xì)胞的生長抑制作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，As203可顯著抑制兩種白血病細(xì)胞株的生長
3、，并呈時(shí)間一劑量依賴性。藥物作用48小時(shí)對(duì)Molt．4細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)為4．689mol／L，對(duì)Mutz．1細(xì)胞的IC50為1．79p．mol／L。用碘化丙啶(PI)和AnnexinV對(duì)As203處理的白血病細(xì)胞株雙標(biāo)記，流式細(xì)胞儀(FACS)檢測結(jié)果顯示AnnexinV+、PI一細(xì)胞(即凋亡細(xì)胞)呈劑量依賴性增加，提示As203導(dǎo)致了白血病細(xì)胞凋亡。同時(shí)，F(xiàn)ACS分析結(jié)合TUNEL檢測法表明：As203誘導(dǎo)的死亡細(xì)胞一部分是TUNEL陰性的。熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞在細(xì)胞膜沒有破壞的情況下PI能否染色細(xì)胞，結(jié)果顯示：藥物處理48h后，細(xì)胞被PI所標(biāo)記，提示藥物處聲衍夕
4、，·六掌碩L學(xué)位論文理能夠?qū)е掳籽〖?xì)胞發(fā)生非凋亡形式的死亡。Western-Blot分析結(jié)果顯示：藥物作用Molt-4細(xì)胞后，啟動(dòng)Caspase蛋白，即Caspase．8和Caspase-9被激活，呈時(shí)間依賴性：Bid也被激活，提示Caspase．9可能通過Bid的激活而被激活。執(zhí)行Caspase蛋白中，Caspase．7呈時(shí)間依賴性激活，而Caspase．3、Caspase一6沒有顯著變化。Caspase抑制劑實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：Pan-caspase抑制劑能部分抑制As203誘導(dǎo)的Molt-4細(xì)胞凋亡，而Caspase-3、Caspase-7和Caspase-8抑制劑均不能抑制A
5、s203誘導(dǎo)的Molt-4細(xì)胞死亡。應(yīng)用透射電鏡觀察藥物作用前后白血病細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，藥物作用后，白血病細(xì)胞的細(xì)胞膜不完整，胞漿中出現(xiàn)大量囊泡。提示As203誘導(dǎo)的Molt-4和Mutz-1細(xì)胞發(fā)生了自噬性細(xì)胞死亡，有別于細(xì)胞凋亡。磷脂酰肌醇激酶3(Phosphatidylinositol3-kinase，P13}㈨KT)遠(yuǎn)路的抑制劑(3．MA)預(yù)育后再和As：03共同作用于白血病細(xì)胞株(4“MAs203作用于Molt-4細(xì)胞48h，2laMAs203作用于Mutz-1細(xì)胞48h)，流式細(xì)胞儀(PI和FSC參數(shù))分析3-MA對(duì)As203誘導(dǎo)的非凋’L二細(xì)胞的抑制作用
6、，結(jié)果表明3-MA顯著抑制了非凋亡細(xì)胞的產(chǎn)生，同時(shí)3-MA顯著增加了細(xì)胞凋亡。用Western．blot分析結(jié)果顯示用三氧化二砷作用后的Molt-4細(xì)胞磷酸化的AKT上調(diào)，而用3-MA作用后的磷酸化的AKT下調(diào)，進(jìn)一步證明As203誘導(dǎo)了白血病細(xì)胞發(fā)生自噬性死亡。近年來研究發(fā)現(xiàn)，自噬性細(xì)胞死亡作為非細(xì)胞凋亡死亡的一種主要方式在惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起著十分重要的作用。但目前對(duì)血液腫瘤的自噬性細(xì)胞死亡及其機(jī)制尚不清楚。Jia等報(bào)道腫瘤壞死因子a誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株發(fā)生凋亡前有自體吞噬現(xiàn)象發(fā)生。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，Beclin一1～人類Bel-2相互作用蛋白基因敲除的小鼠容易發(fā)生
7、上皮細(xì)胞和血液系統(tǒng)惡伊腫瘤。Saeki等報(bào)道應(yīng)用Beelin-I反義寡核苷酸處理HL-60細(xì)胞導(dǎo)致了自噬性細(xì)胞死亡。2003年Kanzawa等的研究表明As203可誘導(dǎo)神經(jīng)膠質(zhì)瘤腫瘤細(xì)胞發(fā)生自噬性細(xì)胞死亡，但作用機(jī)制還不清楚。這些研究和我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果均提示自體吞噬和自噬性細(xì)胞死亡在血液腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，對(duì)血液腫瘤細(xì)胞的自噬性死亡及其信號(hào)途徑研究將有可能為血液腫瘤的治療提供新的靶點(diǎn)。．主持歹，z掌聵}學(xué)位論文我們應(yīng)用Western-blot和定量實(shí)時(shí)RT-PCR研究了A
