溶菌酶的溶菌作用.ppt

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1、第三次實(shí)驗(yàn)Ⅰ溶菌酶的溶菌作用Ⅱ小吞噬實(shí)驗(yàn)溶菌酶的溶菌作用實(shí)驗(yàn)原理溶菌酶（lysozyme）又稱胞壁質(zhì)酶（muramidase）或N-乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶（N-acetylmuramideglycanohydrlase），是正常體液與分泌液中所含的一種小分子堿性蛋白質(zhì)。它能水解革蘭陽(yáng)性菌細(xì)胞壁中的肽聚糖成分(作用于β-1，4糖苷鍵），使細(xì)胞壁崩解。溶菌酶還可與帶負(fù)電荷的病毒蛋白直接結(jié)合，與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復(fù)鹽，使病毒失活。因此，該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。是非特異性免疫中一種重要的體液物質(zhì)。實(shí)驗(yàn)材料與器材1、人的唾液（含有溶菌酶）、溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品、生理鹽

2、水。2、細(xì)球菌（M.Lysodeikticus)。3、1.0%鹽水瓊脂管（7-8mL/管）、滅菌的1mL吸管、毛細(xì)吸管、打孔器、平皿、竹簽和橡皮乳頭等。注：①唾液②生理鹽水（陰性對(duì)照）③溶菌酶（陽(yáng)性對(duì)照）實(shí)驗(yàn)步驟：1、取滅菌的小平皿一個(gè)，用滅菌1mL的吸管吸取0.5mL(9億/mL）細(xì)球菌活菌菌液注入平皿內(nèi)。2、取已溶化并冷卻至45℃-55℃的生理鹽水瓊脂管一支，傾注于上述平皿內(nèi)，迅速水平混勻，平放待凝。3、用打孔器（孔徑為6mm）打孔，用竹簽挑出孔中瓊脂。4、先用清水漱口，略待片刻將唾液吐于滅菌平皿內(nèi)，用毛細(xì)吸管吸出（注意不要有氣泡，不要溢出），并分別加入生理鹽水和

3、溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品。置37℃，18h后觀察結(jié)果。231預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性結(jié)果：加在唾液空周圍出現(xiàn)一圈很明顯的溶菌環(huán)。注意事項(xiàng)在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該注意無(wú)菌操作，否則雜菌生長(zhǎng)會(huì)影響溶菌環(huán)的觀察小吞噬實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理機(jī)體內(nèi)具有吞噬功能的細(xì)胞可分為兩大類，即小吞噬細(xì)胞和大吞噬細(xì)胞。小吞噬細(xì)胞一般指血液中的中性粒細(xì)胞。中性粒細(xì)胞（neutrophilicgranulocyte）在瑞氏染色血涂片中，胞質(zhì)呈無(wú)色或極淺的淡紅色，有許多彌散分布的細(xì)小的（0.2～0.4微米）淺紅或淺紫色的特有顆粒。細(xì)胞核呈桿狀或2～5分葉狀，葉與葉間有細(xì)絲相連。其顆粒表面有一層膜包裹，顆粒中含髓過(guò)氧化物酶、酸性磷酸酶、吞噬素

4、、溶菌酶、β葡糖苷酸酶、堿性磷酸酶等。中性粒細(xì)胞具趨化作用、吞噬作用和殺菌作用。實(shí)驗(yàn)材料與器材：1、表面葡萄球菌菌液（9億/mL）。2、3.8%枸櫞酸鈉或肝素（25U/mL）。3、毛細(xì)吸管、凹玻片、載玻片、牙簽、甲醇、瑞氏-姬娒薩染料、PH6.4PB、酒精、棉球、采血針等。實(shí)驗(yàn)步驟：1、取厚凹玻片一張，在凹孔中滴加一滴（0.4mL）3.8%枸櫞酸鈉或肝素（25U/mL）。2、酒精棉球消毒手指后，用采血針從消毒部位采取2大滴（約0.2mL）加入凹孔中混勻。3、加表皮葡萄球菌菌液1滴（0.02-0.04mL），然后用牙簽輕輕攪勻。4、將玻片放濕盒內(nèi)，置37℃孵箱中40-50

5、min。5、作用完畢，取出1滴制成薄片，自然干燥。6、置瑞氏液1min，置PH6.4PB中3min，置瑞氏-姬娒薩染料染5-10min，蒸餾水洗，待干鏡檢。預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果胞漿呈淡藍(lán)色或淡紅色，細(xì)菌呈深藍(lán)色或紫色，紅細(xì)胞呈褐色，細(xì)胞核呈紫紅色。注意事項(xiàng)1、個(gè)體差異、年齡、健康狀況的不同，其吞噬能力亦不同。2、涂血片時(shí)不宜太厚，否則不宜觀察。結(jié)果謝謝!胞質(zhì)呈無(wú)色或極淺的淡紅色，有許多彌散分布的細(xì)小的（0.2～0.4微米）淺紅或淺紫色的特有顆粒。細(xì)胞核呈桿狀或2～5分葉狀，葉與葉間有細(xì)絲相連。返回油鏡下見中性粒細(xì)胞胞漿呈淡蘭色，核分葉、紫紅深染，葡萄球菌呈蘭色?？梢娭行粤＜?xì)胞胞

6、漿內(nèi)吞噬有很多白葡菌。返回