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1、鐵皮石斛愈傷組織穩(wěn)定培養(yǎng)體系的建立摘要：為了建立穩(wěn)定的鐵皮石斛愈傷組織培養(yǎng)體系，試驗(yàn)開展了鐵皮石斛愈傷組織最佳外植體類型、誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方以及繼代培養(yǎng)基配方的篩選等研究。結(jié)果表明，采用鐵皮石斛莖段為外植體，愈傷組織誘導(dǎo)效果最好；初步誘導(dǎo)出的愈傷組織在MS+2mg?L-lKT+2mg?L-l2,4-D+O.2mg?L-lNAA的培養(yǎng)基上能夠誘導(dǎo)生長(zhǎng)速度快、質(zhì)地硬、結(jié)構(gòu)松散的理想愈傷組織；經(jīng)過篩選的愈傷組織在MS+O.5mg?L-lKT+1mg?L-l2,4-D的培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，愈傷組織可以長(zhǎng)時(shí)間保持理想
2、狀態(tài)。關(guān)鍵詞：鐵皮石斛；培養(yǎng)基；愈傷組織；激素中圖分類號(hào)：S682.31文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：ADOI編碼:10.3969/j.issn.1006-6500.2018.08.016Abstract：InordertoestablishastablecallusculturesystemofD?candidum,theoptimalexplanttype,callusinductionmediumformula,andsubculturemediumformulawerestudiedandscreened?Ther
3、esultsshowedthatusingthestemsofD.candidumasexplantshadthebestcallusinductioneffect；themediumMS+2mg?L~1KT+2mg?L~12.4-D+O.2mg?L~1NAAcouldinducetheidealcalluswithfastgrowthrate,hardtextureandloosestructure；thesubculturemediumMS+0.5mg?LTKT+1mg?LT2,4~Dcouldrem
4、aintheinductedidealcallusaboveforalongtime.Keywords:Dendrobiumcandidum；medium；callus；hormone我國(guó)是中草藥生產(chǎn)的大國(guó)，近年來，由于土地資源的限制和環(huán)境變化，導(dǎo)致一些中草藥生產(chǎn)受到了嚴(yán)重影響，隨著人們對(duì)中草藥有效成分的認(rèn)識(shí)，越來越多的研究集中在中藥有效成分的提取和生產(chǎn)上，這也是中藥國(guó)際化的必然趨勢(shì)[1-3]o利用植物愈傷組織進(jìn)行次生代謝物的生產(chǎn)，在藥用植物上越來越多。近年來，通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)離體生產(chǎn)藥用植物的有效成
5、分逐漸受到重視[4-7]o采用愈傷組織進(jìn)行生物制藥的研究已經(jīng)成為藥用植物離體生產(chǎn)的主流，其主要優(yōu)勢(shì)有：第一，愈傷組織生長(zhǎng)速度快，在短時(shí)間內(nèi)獲得大量的細(xì)胞，從而獲取更多的藥用成分；第二，愈傷組織容易誘導(dǎo)，而且易于體外控制,可以在離體條件下改變培養(yǎng)基成分，生產(chǎn)出更多的藥用成分；第三，愈傷組織的培養(yǎng)成本較低；第四，可以利用愈傷組織進(jìn)行離體誘變，選育產(chǎn)量高的細(xì)胞株系。目前，愈傷組織在次生代謝物生產(chǎn)中已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用，在未來生物制藥領(lǐng)域必將發(fā)揮其重要作用。本研究通過誘導(dǎo)鐵皮石斛外植體產(chǎn)生生長(zhǎng)穩(wěn)定、組織形態(tài)理想的愈傷
6、組織，目的是利用這類愈傷組織進(jìn)行一定的科學(xué)研究或利用愈傷組織培養(yǎng)生產(chǎn)有效藥物成分，為生物制藥的發(fā)展奠定基礎(chǔ)。1材料和方法1.1試驗(yàn)材料研究所用鐵皮石斛組培苗由天津農(nóng)學(xué)院園林植物實(shí)驗(yàn)室提供。1.2試驗(yàn)方法1.2.1鐵皮石斛愈傷組織誘導(dǎo)最佳外植體的篩選本試驗(yàn)釆用鐵皮石斛組培苗的不同組織部位作為外植體，進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，篩選出愈傷組織誘導(dǎo)效果最好的外植體類型。剪取鐵皮石斛組培苗，在超凈臺(tái)中將葉片、莖段和根剪下,造成兩端都有傷口的外植體，其中葉片剪掉葉尖，莖段不帶腋芽，根剪掉根尖。將剪好的外植體接種到提前準(zhǔn)備的
7、MS+2mg-L-12,4-D+30g-L-1蔗糖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織。將接種好的三角瓶放到組培室中進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)條件：溫度25°C,24h連續(xù)光照，光照強(qiáng)度1000lxo接種后每天觀察外植體傷口部位的變化和外植體的生長(zhǎng)情況，60d時(shí)記錄愈傷組織誘導(dǎo)情況。1.2.2不同激素對(duì)鐵皮石斛愈傷組織誘導(dǎo)的影響根據(jù)1.2.1試驗(yàn)結(jié)果顯示，莖段誘導(dǎo)的愈傷組織最好，為進(jìn)一步獲得結(jié)構(gòu)松散、質(zhì)地較硬的理想愈傷組織類型，本試驗(yàn)采用含有不同激素的培養(yǎng)基進(jìn)行愈傷組織再次誘導(dǎo)，篩選出愈傷組織形態(tài)和生長(zhǎng)速度最好的培養(yǎng)基配方。取鐵皮石
8、斛組培苗莖段誘導(dǎo)出的愈傷組織，將其分割成直徑2?3mm的小塊，分別接種到事先配制好的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的BA、KT、NAA和2,4-Do培養(yǎng)條件與1.2.1相同。1.2.3不同激素石斛愈傷組織穩(wěn)定生長(zhǎng)的影響為了使1.2.2試驗(yàn)中獲得的結(jié)構(gòu)松散、質(zhì)地較硬、生長(zhǎng)快速的愈傷組織長(zhǎng)時(shí)間保持原有狀態(tài)和繼代生長(zhǎng)，本試驗(yàn)選用不同培養(yǎng)基，對(duì)愈傷組織進(jìn)行繼代培養(yǎng)，篩選出適宜鐵皮石斛愈傷組織穩(wěn)定生長(zhǎng)的培養(yǎng)基
