實(shí)驗(yàn)2_凝集反應(yīng)_ELISA(雙抗原夾心法).ppt

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1、1免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)課貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室21、ABO血型鑒定--玻片凝集反應(yīng)（1份/1人）2、乙型肝炎病毒表面抗體檢測(cè)--ELISA法(1份/1人）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容3（一）玻片凝集反應(yīng)已知抗血清與未知顆粒性抗原置于清潔玻片上，在一定的條件下，若兩者相對(duì)應(yīng)，則會(huì)發(fā)生凝集。本方法主要用于抗原的定性分析，如菌種鑒定、ABO血型鑒定等。ABO血型系統(tǒng)45ABO血型鑒定步驟紅細(xì)胞懸液的制備（用于血型鑒定及ELISA實(shí)驗(yàn)）1.取EP管1支，加入5滴生理鹽水2.消毒耳垂或手指皮膚3.用采血針采1-2滴血，加入盛有生理鹽水的EP管中混勻4.2000rpm，離心3min5.取紅細(xì)胞懸液用于ABO血型鑒定6.取

2、已加有抗A血清與抗B血清載玻片1張，分別加入待測(cè)抗原各1滴，并用牙簽混勻。7.置室溫5分鐘左右觀察結(jié)果。取上清用于ELISA實(shí)驗(yàn)ABO血型鑒定的判斷B型抗A型標(biāo)準(zhǔn)血清抗B型標(biāo)準(zhǔn)血清抗A型標(biāo)準(zhǔn)血清抗B型標(biāo)準(zhǔn)血清A型抗A型標(biāo)準(zhǔn)血清抗B型標(biāo)準(zhǔn)血清O型抗A型標(biāo)準(zhǔn)血清抗B型標(biāo)準(zhǔn)血清AB型示意圖7注意事項(xiàng)用牙簽研磨時(shí)，注意防止將抗A血清帶到抗B血清中，反之亦然。如果凝集現(xiàn)象不太明顯時(shí)，可用顯微鏡觀察。8乙型肝炎病毒表面抗體的檢測(cè)——雙抗原夾心ELISA法測(cè)定原理采用純化乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）包被反應(yīng)板，加入待檢標(biāo)本，當(dāng)標(biāo)本中存在抗-HBs時(shí)，該抗體與包被HBsAg結(jié)合，再加入辣根過

3、氧化物酶標(biāo)記乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg–HRP），最后形成HBsAg-抗HBs-酶標(biāo)記抗原復(fù)合物，加入底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)。9無(wú)菌采血，離心2000rpm,3min，取上清作為待測(cè)標(biāo)本(見玻片凝集實(shí)驗(yàn))每孔加入酶標(biāo)記抗原1滴，37℃孵育30min反應(yīng)板中各加入待測(cè)標(biāo)本2滴，同時(shí)設(shè)陰性、陽(yáng)性、空白對(duì)照孔(NS)（反應(yīng)板已用純化HBsAg包被）手工洗板，棄液拍干，重復(fù)5次每孔加入顯色劑A液、B液各1滴，置37℃孵育15分鐘每孔加入終止液1滴，混勻目測(cè)法：與陽(yáng)性和陰性對(duì)照比較，觀察顏色深淺判斷結(jié)果【步驟】10實(shí)驗(yàn)報(bào)告玻片凝集反應(yīng)-ABO血型鑒定酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（雙抗原夾心ELISA）知

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