HPLC流動(dòng)相溶劑的選擇和緩沖液的配制.doc

《HPLC流動(dòng)相溶劑的選擇和緩沖液的配制.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。

1、HPLC流動(dòng)相溶劑的選擇和緩沖液的配制-之配制　　緩沖液的配置(最佳方法)　　1.將緩沖液藥品溶解在水中制成緩沖液(溶液A)　　2.用pH計(jì)確定或調(diào)節(jié)溶液A的pH?！　?.將一定體積(如200mL)的有機(jī)溶劑B與由步驟2配制的溶液A(如800mL)混合，制成最終流動(dòng)相(此處的有機(jī)相為20%)　　4.檢查最終流動(dòng)相的pH(此步驟為選項(xiàng))由于測定含有有機(jī)調(diào)解劑的流動(dòng)相pH計(jì)發(fā)生飄移，使其測定pH不很可靠.所以上面的步驟4一般只有在考察誤差的主要來源時(shí)采用，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室皆略去此步驟?！　×硗庖⒁馍媳碇姓{(diào)節(jié)劑的濃度，不適當(dāng)?shù)臐舛群筒ㄩL選擇，會(huì)造成基線本底吸收太高，基線不穩(wěn)，影響分析。要注意溶

2、劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作洗脫的流動(dòng)相。有些溶劑在一定的比例內(nèi)互溶，超出一定的范圍后就不會(huì)互溶。例如：乙腈和1mol/L的醋酸銨(pH5.16)做梯度洗脫，乙腈含量超過70%時(shí)就會(huì)出現(xiàn)不溶，甲醇和已烷混合，甲醇含量高于30%時(shí)就會(huì)分層等。當(dāng)有機(jī)溶劑和緩沖溶液混合時(shí)還可能析出鹽的結(jié)晶體，尤其使用磷酸鹽時(shí)需特別小心?！　【C述　　混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因此在梯度洗脫時(shí)常會(huì)出現(xiàn)壓力變化，例如純水或甲醇的粘度都比較小，但是當(dāng)二者以相近的比例混合時(shí)粘度會(huì)增大很多，此時(shí)的柱壓是純水或甲醇為流動(dòng)相時(shí)的兩倍。因此要注意防止梯度洗脫過程中壓力超過輸液泵或色譜柱所能承受的最大壓力。HPLC流

3、動(dòng)相溶劑的選擇和緩沖液的配制-之選擇　　HPLC流動(dòng)相溶劑選擇的一般原則：　　1.溶劑要與使用的檢測器匹配對UV-Vis，主要考慮本底吸收，下面是常用溶劑在不同波長下的吸收值：200205210215220230240250　　乙腈0.050.030.020.010.01<0.01　　甲醇2.061.000.530.370.240.110.050.02　　THF2.442.572.311.801.540.940.420.21　　醋酸1%2.612.632.612.432.170.870.140.01　　磷酸0.1%<0.01　　三氟乙酸1.200.780.540.340.200.06<

4、0.01　　三乙胺1%2.332.422.502.452.371.960.500.12　　研究表明，當(dāng)流動(dòng)相的A>0.7的時(shí)候，基線噪聲會(huì)顯著增加，一般選擇的吸收值<0.5。當(dāng)A>1.0時(shí)，基本就不能用使了。對于示差折光檢測器，主要考慮樣品和流動(dòng)相的折光率，這里不再贅述?！　?.選用的溶劑粘度要低、沸點(diǎn)適中使用低粘度溶劑，可減小容質(zhì)的傳質(zhì)阻力，降低柱壓，利于提高柱效。從分離制備和色質(zhì)連用考慮，沸點(diǎn)要適中，低沸點(diǎn)的溶劑有它的優(yōu)點(diǎn);但僅僅用于分析，沸點(diǎn)太低，反而由于溶劑的揮發(fā)，造成保留時(shí)間的變化?！　?.盡量不用高毒性的溶劑不只是環(huán)境，單從我們自身的安全考慮，當(dāng)然用低毒溶劑最好。　　4.溶

5、劑對樣品有足夠的溶解力樣品如果不能溶解在選用的溶劑里，還怎么分析?不屑多解釋。但如果樣品在流動(dòng)相里溶劑仍然不大，可以用樣品的最佳溶劑先溶解，再用流動(dòng)相稀釋，就可以了。　　知道了上面選擇溶劑的一般原則，就不難理解為什么不同乙醇、丙醇做流動(dòng)相的原因了，因?yàn)樗鼈兊恼扯却??！　∵€有丙酮，雖然粘度和毒性較低、溶解度大、極性適中，但用于它的截至吸收波長為330nm，所以不常用，如果樣品的吸收大于330nm，其實(shí)用丙酮是一個(gè)不錯(cuò)的選擇。