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《用于細(xì)胞成像的雙氰基二苯代乙烯衍生物雙光子熒光銀離子探針.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第43卷分析化學(xué)(FENXIHUAXUE)研究報(bào)告第4期2015年4月ChineseJournalofAnalyticalChemistry507～5l1DOI：10．11895／j．issn．0253-3820．140907用于細(xì)胞成像的雙氰基二苯代乙烯衍生物雙光子熒光銀離子探針黃池寶陳華仕曾伯平陳曉遠(yuǎn)(遵義師范學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院，遵義563002)(韶關(guān)大學(xué)英東生物工程學(xué)院農(nóng)業(yè)工程系，韶關(guān)512005)摘要雙光子熒光顯微成像兼具諸如近紅外激發(fā)、暗場成像、避免熒光漂白和光致毒、定靶激發(fā)、高橫向分辨率與縱向分辨率、降低生物組織吸光系數(shù)及降低
2、組織自發(fā)熒光干擾等特點(diǎn)，顯著地優(yōu)于單光子熒光顯微成像，為生命科學(xué)研究提供了更為便利的工具。因此雙光子熒光探針適合于生物檢測與成像。制備了衍生于二苯代乙烯的雙光子熒光銀離子探針，此探針以擁有異常大的雙光子吸收截面(8)的4珥基一2，5-二氰基4一氨基二苯乙烯(DCS)作為雙光子熒光母體，以6．芳基一3，9一二硫-6一氮雜癸烷(TAU)為配體。探針顯示了大的8(在MeCN中，950GM)、對銀離子有高的靈敏性與選擇性、強(qiáng)的雙光子熒光(790nm激光激發(fā)時)。探針的絡(luò)合常數(shù)為lgK=5．764-0．05。探針能選擇性地檢測和成像活細(xì)胞中的游離鯫
3、，可用于細(xì)胞中微量Ag的分析檢測與成像。此探針為開發(fā)理想的雙光子熒光探針提供了可供借鑒的平臺。關(guān)鍵詞雙光子熒光探針；銀離子；細(xì)胞成像；雙光子發(fā)射截面1引言銀離子(Ag)可作為抗生劑[1I2]、植物與哺乳動物'的轉(zhuǎn)錄抑制劑、耐質(zhì)粒轉(zhuǎn)變靶標(biāo)_6J，金屬蛋白中Cu／Cu的氧化還原鈍化探針l9。為了研究生物體內(nèi)她的功能和性質(zhì)以及它的結(jié)合方式，探索銀對生命肌體的影響，開發(fā)了Ag單光子熒光探針l1，”]，但單光子熒光探針檢測時易產(chǎn)生光致毒與光漂白，只能用于組織或細(xì)胞的淺層成像，易受組織自發(fā)熒光的干擾。為了克服這些問題，有必要開發(fā)雙光子熒光Ag探針，雙
4、光子熒光顯微成像兼具諸如近紅外激發(fā)、暗場成像、避免熒光漂白和光致毒、定靶激發(fā)、高橫向分辨率與縱向分辨率、降低生物組織吸光系數(shù)及降低組織自發(fā)熒光干擾等特點(diǎn)，顯著優(yōu)于單光子熒光顯微成像，為生命科學(xué)研究提供了更為有效的工具。因此雙光子熒光探針適合于生物檢測與成像。本研究以雙氰基二苯代乙烯(DCS)14]作雙光子熒光母體，選用6．芳基一3，9．二硫．氮雜十一烷(TAU)]作Ag受體，合成了雙光子熒光探針DAg，并對其光物理性質(zhì)、對離子的識別作用及細(xì)胞成像進(jìn)行了深入研究。2實(shí)驗(yàn)部分2．1儀器與試劑VARIANINOVA400MHz核磁共振儀；HP8
5、453紫外．可見分光光度儀(美國惠普公司)；RF．5000熒光分光光度儀(日本島津公司)；EIMS譜用GC—TOFMS(EI源)(美國WATERS公司)；XT-4雙目顯微熔點(diǎn)測定儀；HP1100LC／ESI—MSD型電噴霧質(zhì)譜儀；FT／IR-430紅外光譜儀(波數(shù)掃描范圍350～7800cm～，KBr壓片法)；Perkin2400(II)元素分析儀；鎖模飛秒鈦藍(lán)寶石激光器(coherent，Mira900一F)。2，5．二溴對二甲苯(2)¨、2，5-Z．甲基對苯二甲腈(3)16]、2．溴甲基．5．甲基對苯二甲腈(4)17]、1，4．二氰基
6、-2．甲基．5．(二乙基磷?；谆?苯(5)17]、4．[雙一(2一氯乙基)氨基]苯甲醛(7)18]和4一[Ⅳ，Ⅳ一二(2一乙硫基乙基)]氨基苯甲醛(8)15]]均根據(jù)文獻(xiàn)合成(合成路線見圖解1)；所用試劑均為分析純級，各試劑使用前均經(jīng)除水精制。2014—10-07收稿：2014．12-24接受本文系廣東省自然科學(xué)基金(No．s2011040000536)、湖南省科技計(jì)劃項(xiàng)目(No．2011RS4020)、貴州省教育廳2014年度自然科學(xué)重點(diǎn)研究項(xiàng)目(黔教合KY字[2014]296)資助$E—mail：huangchibao@163．co
7、rn508分析化學(xué)第43卷2．22，5-二氰基4-甲基一4-[Ⅳ，Ⅳ-二(2-乙硫基乙基)]氨基二苯乙烯(DAg)的合成4一[Ⅳ，／、，一二(2一乙硫基乙基)]氨基苯甲醛(8)(339mg，1．14mmo1)，NaH(55mg2．28mmo1)置于裝有3mLTHF的25mL圓底燒瓶中，將燒瓶置于冰水浴中冷卻到0℃。在氮?dú)獗Ｗo(hù)和攪拌下，將溶于10mLTHF的1，4一二氰基．2一甲基-5(二乙基磷?；谆?苯(5)(333mg，1．14mmo1)的溶液逐滴滴加到反應(yīng)液中，滴加結(jié)束后，再于此溫度下繼續(xù)攪拌反應(yīng)12h。反應(yīng)終止后，加入5mL水，產(chǎn)
8、品用乙酸乙酯萃取，無水硫酸鎂干燥，過濾真空脫除溶劑，粗品用柱色譜分離，依次用正己烷一CH，C1，(20％～0％，)、用乙酸乙酯一CHC1(0～20％，v／v)進(jìn)行洗脫，丙酮重結(jié)晶，得黃色粉末，
