葫蘆脲[7]包合物為熒光探針測(cè)定青霉胺.pdf

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1、第38卷分析化學(xué)(FENXIHUAXUE)研究簡(jiǎn)報(bào)第12期2010年12月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1813～1816DOI：10．3724／SP．J．1096．加10．01813以黃連素／葫蘆脲[7]包合物為熒光探針測(cè)定青霉胺楊吉元申愛卓杜黎明+李常風(fēng)吳昊常銀霞(山西師范大學(xué)分析測(cè)試中心，臨汾041004)摘要黃連素能和葫蘆脲[7]生成1：1的主一客體穩(wěn)定的包合物并使其熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。當(dāng)加入青霉胺后，黃連素／葫蘆脲[7]所形成的包合物的熒光迅速猝滅，據(jù)此建立了一種簡(jiǎn)便靈敏的

2、檢測(cè)青霉胺的新方法。青霉胺濃度在90—3000“g／L范圍內(nèi)與熒光猝滅值A(chǔ)F呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)0．9996。檢出限為30斗g／L。本方法的加標(biāo)回收率為98．3％～103．6％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0．68％～0．95％。本方法成功用于藥片中青霉胺的測(cè)定。關(guān)鍵詞熒光探針；青霉胺；黃連素；葫蘆脲[7]1引言葫蘆脲[rt](Cucurbit[n]uril，n=4～12，CB[n])是超分子化學(xué)中繼環(huán)糊精、冠醚及杯芳烴之后發(fā)展起來的一類新型高度對(duì)稱的桶狀系列大環(huán)化合物，由／'t個(gè)甘脲單元和2凡個(gè)亞甲基單元鍵合而成，具有疏水的內(nèi)

3、部空腔及由環(huán)繞的羰基氧原子組成的端口。這就使得它能夠通過疏水作用、氫鍵、離子偶極等鍵合作用鍵合多種有機(jī)分子，與極性和尺寸適合的有機(jī)客體可以形成包合物，而包合物的形成可以改變客體分子的光物理和光化學(xué)性質(zhì)?。由于葫蘆脲[7]粒(CB[7])良好的水溶性和包合能力而使之在分子識(shí)別方面得到廣泛應(yīng)用¨一J。青霉胺(Penicillamine，PenA)化學(xué)名稱3，3-二甲基．(D)．半胱氨酸，是一種含有巰基的氨基酸，由于它對(duì)銅、汞、鉛等重金屬離子有很強(qiáng)的絡(luò)合作用，可解由重金屬離子引起的中毒；青霉胺還有明顯的免疫抑制作用和抗炎作用，

4、對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及慢性活動(dòng)肝炎等免疫性疾病均有良好的療效。目前，青霉胺的分析方法有分光光度法¨j]、化學(xué)發(fā)光法№】、液相色譜法‘7’8】、毛細(xì)管電泳法[9,101和電化學(xué)法‘t1,12]等。青霉胺分子本身無熒光，文獻(xiàn)[13，14]采用衍生化熒光光譜法測(cè)定了青霉胺。衍生化方法由于操作繁雜、靈敏度不高、重現(xiàn)陛差而在實(shí)際應(yīng)用中很難推廣，因此建立一種簡(jiǎn)便、快速、重現(xiàn)性好的測(cè)定青霉胺的高靈敏度熒光光譜新方法十分必要。鹽酸黃連素(Berberinehydroehloride，BRH)是一種異喹啉類生物堿，具有抗菌、消炎作用。本課題組

5、已經(jīng)對(duì)異喹啉藥物與CB[n]之間的超分子包合作用進(jìn)行了研究¨n”J，發(fā)現(xiàn)cB[5～8]均能與異喹啉藥物生成l：l的主一客體包合物并使藥物的熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)采用熒光光譜法研究了青霉胺與BRH在CB[7]空腔中的包合競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)青霉胺能使BRH／CB[7]包合物的熒光發(fā)生劇烈猝滅，其熒光猝滅強(qiáng)度與青霉胺的濃度呈良好的線性關(guān)系。據(jù)此建立了一種以BRH／CB[7]包合物為探針的測(cè)定青霉胺的熒光光譜新方法。本方法操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，選擇性好，可用于藥物制劑中青霉胺含量的測(cè)定。2實(shí)驗(yàn)部分2．1儀器與試劑F-4500型熒光分

6、光光度計(jì)(日本日立公司)，激發(fā)和發(fā)射狹縫均為5．0nm；PHS-3TC精密數(shù)顯酸度計(jì)(上海天達(dá)儀器有限公司)。青霉胺標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品鑒定所)，于105℃干燥至恒重，準(zhǔn)確稱取適量的青霉胺標(biāo)準(zhǔn)品，用二次蒸餾水配制成1．0×10。3mo]／L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，所需標(biāo)準(zhǔn)工作液用水稀2010-03．18收稿；2010416-25接受本文系教育部高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金(No．20091404110001)資助項(xiàng)目·E—mail：lmd@dns．$】tdtlU．edu．cn分析化學(xué)第38卷釋儲(chǔ)備液而制得；葫蘆脲[7]按文獻(xiàn)報(bào)

7、道的方法制備和表征¨8

8、，用水配成1．2X10。mol／L的儲(chǔ)備液；鹽酸黃連素(中國(guó)藥品生物制品鑒定所)，配制1．2X10。3mol／L鹽酸黃連素溶液；青霉胺片劑(上海醫(yī)藥集團(tuán)有限公司信誼制藥總廠批號(hào)：090304)；其余試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為二次蒸餾水。2．2實(shí)驗(yàn)方法于10mL比色管中分別加入1．0mL1．2X10。4mol／LCB[7]溶液和1．0mL1．2×10。4mol／L的BRH溶液，再加入1．0mL0．1mol／LHCI溶液，在(25．0±1)℃下振搖15rain，加人適量青霉胺溶液，再振搖15min，用

9、水定容至刻度，并用10mill石英池，以347am為激發(fā)波長(zhǎng)，在495am處測(cè)定試劑空白熒光強(qiáng)度R及青霉胺加入到包合物溶液后的熒光強(qiáng)度F，計(jì)算熒光猝滅值A(chǔ)F(△F=R—F)，以△F對(duì)青霉胺濃度作工作曲線。3結(jié)果與討論3．1CB[7]對(duì)BRI-I的熒光增敏作用研究了BRH及其包合物的光譜特性。由圖1可見，BRH在水溶液