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《臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞教學(xué)教案.ppt》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞定義臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（MesnchymalStemCells，MSCs）是指存在于新生兒臍帶組織中的一種多功能干細(xì)胞，它能分化成許多種組織細(xì)胞。表型特征：CD31-,CD34-,CD45-,CD44+,CD73+,CD90+,CD105+,HLA-DR-特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）具有較高的分化潛能，可向多個(gè)方向進(jìn)行分化。它在骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經(jīng)、肝、內(nèi)皮和心肌等組織工程方面具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。從人臍帶中分離出MSCs，細(xì)胞含量、增殖能力優(yōu)于骨髓MSCs，免疫原性比骨髓MSCs低，并且
2、具有取材方便，無(wú)倫理學(xué)爭(zhēng)議等優(yōu)點(diǎn)，因此越來(lái)越受到研究工作者們的關(guān)注。培養(yǎng)方法酶消化法組織塊貼壁法酶消化法去除血管，將臍帶組織剪成1~3cm大小組織塊，用無(wú)血清培養(yǎng)基洗2次，將組織浸泡在0.1%膠原酶中，37℃消化4~6小時(shí)。加入生理鹽水（消化液體積的2倍），2000r/min離心5min，棄上清，加入2.5%胰蛋白酶，37℃處理30min，加入生理鹽水（消化液體積的2倍），100目濾網(wǎng)過(guò)濾，濾液2000r/min離心5min，棄上清。重復(fù)兩次。細(xì)胞計(jì)數(shù)，將細(xì)胞調(diào)成一定濃度用于培養(yǎng)。組織塊貼壁法取新鮮健康臍帶，用PBS沖洗干凈后
3、，用剪刀鑷子剔去血管，剝出里面的華通氏膠，將所得組織充分剪碎至1mm^3大小，加入α-MEM培養(yǎng)液置于37℃，5%的CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，培養(yǎng)液中含10%FBS，100U/ml青霉素，100U/ml鏈霉素。臍帶組織培養(yǎng)5-7天后，可見有部分細(xì)胞從組織塊周圍爬出，形態(tài)呈細(xì)小的梭形，一周后，細(xì)胞開始迅速增殖，形成大小不等的細(xì)胞集落。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)方法采用無(wú)血清培養(yǎng)基（可含10%受者滅活血清）將細(xì)胞調(diào)成懸液，按2×10^4/cm^2接種于培養(yǎng)瓶，37℃、5%的CO2條件下培養(yǎng)4d后全量換液，吸棄非貼壁細(xì)胞。每3d換液，細(xì)胞覆蓋
4、瓶底80%時(shí)，0.25%胰蛋白酶-1mmol/LEDTA消化，按1：3傳代。培養(yǎng)3周左右，胰酶消化細(xì)胞，細(xì)胞懸液2000r/min離心5min，棄上清后加入生理鹽水混勻，2000r/min離心5min，重復(fù)2次。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果新分離的臍帶單個(gè)核細(xì)胞呈紡錘形原代培養(yǎng)6h后有大量細(xì)胞貼壁，貼壁細(xì)胞呈梭形、多角形培養(yǎng)7天細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，細(xì)胞平行或漩渦狀排列。培養(yǎng)10天細(xì)胞可達(dá)80%融合。傳代后的細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯改變，排列更加整齊。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在臨床上的應(yīng)用1.能具有較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用，可用于治療紅斑狼瘡和硬皮病等自身免疫性
5、疾病，降低細(xì)胞或器官移植后的免疫排斥反應(yīng)，提高細(xì)胞或器官移植的成功率。2.能促進(jìn)造血恢復(fù)功能，與單一造血干細(xì)胞移植比較，間充質(zhì)干細(xì)胞和造血干細(xì)胞共移植能顯著提高白血病和難治性貧血等疾病的治療效果。3.能修復(fù)損傷或病變的組織器官，用于治療骨和肌肉衰退性疾病、心腦血管疾病、肝病、腦及脊髓神經(jīng)損傷和老年癡呆等。4.能在體內(nèi)或體外通過(guò)生物因子定向誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞、胰島素分泌細(xì)胞等，從而為帕金森、糖尿病等治療提供新的治療方式，是目前干細(xì)胞研究的熱點(diǎn)之一
