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《高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蜂蜜中5種頭孢菌素.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、第38卷分析化學(xué)(FENXIHUAXUE)研究簡(jiǎn)報(bào)第5期2010年5月ChineseJournalofAnalytic~Chemistry735～739DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．O0735高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蜂蜜中5種頭孢菌素李學(xué)民曹彥忠張進(jìn)杰范春林劉曉茂錢小清(秦皇島出入境檢驗(yàn)檢疫局，秦皇島0660O4)摘要建立了用高效液相色譜一電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜(LC—MS—MS)測(cè)定蜂蜜中5種頭孢菌素殘留量的方法。蜂蜜樣品用磷酸鹽緩沖溶液溶解，經(jīng)OasisHLB固相萃取柱凈化。5種頭孢菌素在c柱上以乙腈一水為流動(dòng)相梯度洗脫條件下完成分離，電噴
2、霧電離串聯(lián)質(zhì)譜在正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式下進(jìn)行測(cè)定。添加濃度在2～100g／kg范圍時(shí)，回收率為84．2％～103．6％；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3．89％～9．08％。本方法頭孢唑啉的定量限為10，頭孢匹林、頭孢氨芐、頭孢洛寧、頭孢喹肟的定量限為2．0g／kg。關(guān)鍵詞高效液相色譜一電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜；頭孢菌素；蜂蜜1引言頭孢菌素是分子中含有頭孢烯和頭霉烯兩類一內(nèi)酰胺類的半合成抗生素，具有廣譜強(qiáng)殺菌、能耐酸、耐青霉素酶及過敏反應(yīng)發(fā)生率比青霉素低的特點(diǎn)，主要對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和部分革蘭氏陰性菌具有殺菌作用¨J。隨著頭孢菌素化學(xué)研究的不斷深入，在動(dòng)物養(yǎng)殖及疾病治療中廣泛應(yīng)用，導(dǎo)致在動(dòng)物機(jī)體組織中
3、產(chǎn)生頭孢菌素殘留，對(duì)人體健康造成危害。因此，世界各國(guó)對(duì)部分動(dòng)物源性產(chǎn)品中頭孢菌素殘留量均提出了限量要求，如美國(guó)FDA規(guī)定牛奶中頭孢匹林最高殘留限量(MRL)為20，牛肉未蒸煮可食組織中頭孢匹林最高殘留限量為100g／kg；歐盟規(guī)定牛奶中頭孢菌素最高殘留限量為20～100g／kg；日本肯定列表規(guī)定牛肉中頭孢菌素最高殘留限量為10～1000ixg／kg，蜂蜜中頭孢菌素最高殘留限量還未見報(bào)道。牛奶、動(dòng)物組織中頭孢菌素殘留量的檢測(cè)方法有微生物法、酶聯(lián)免疫法、薄層色譜法、凝膠電泳法J、高效液相色譜法～和液相色譜電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法J。本方法參考了文獻(xiàn)[8]，研究了蜂蜜中5種頭孢菌素的
4、提取和凈化效果。以磷酸鹽緩沖溶液為提取液，采用固相萃取柱凈化，液相色譜．電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。本方法比文獻(xiàn)[8]方法操作簡(jiǎn)單，樣品不用乙腈提取和濃縮，回收率高，是一種既能定性又能定量的檢測(cè)方法，完全適用于蜂蜜中5種頭孢菌素殘留量的檢測(cè)。2實(shí)驗(yàn)部分2．1儀器與試劑API3000液相色譜。串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀(美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司)，配有電噴霧離子源；1100高效液相色譜儀(Angilent公司)；液體混勻器；玻璃固相萃取裝置；真空泵；pH900型pH計(jì)(瑞士Precisa公司，測(cè)量精度±0．02)。OasisHLBC固相萃取柱(500mg，6mL)：使用前分別用5mL甲醇、1
5、0mL水和5mL磷酸鹽緩沖溶液預(yù)處理，保持柱體濕潤(rùn)。頭孢唑啉(CAS：25953—19—9)、頭孢匹林(CAS：24356-60·3)、頭孢氨芐(CAS：16549-56—7)、頭孢洛寧(CAS：5575—21—3)、頭孢喹肟(CAS：118443—89．3)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)由Sigma公司提供；甲醇、乙腈為色譜純；乙酸、NaOH、NaH：PO為優(yōu)級(jí)純；磷酸鹽緩沖溶液(0．15mol／L，pH=8．5)。其它試劑為分析純。2．2液相色譜與質(zhì)譜條件液相色譜條件：流動(dòng)相A為水，含0．1％()甲酸；B為乙腈。梯度洗脫：0～2rain，95％A：2～8min，40％A；8～15min，
6、95％A。流速：200I~L／min。色譜柱：ZORBAXSB—C18(150mm×2．1mm，3．5m)；進(jìn)樣量：20L。2009-06-05收稿；2010-01-05接受E—mml：ciqlixm@163．com736分析化學(xué)第38卷質(zhì)譜條件：離子源為電噴霧離子源(ESI)；掃描方式：正離子掃描；檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；噴霧電壓(IS)：5500V；霧化氣(NEB)：0．055MPa，氣簾氣(CUR)：0．079MPa，輔助氣(AUIX)：6L／rain；離子源溫度40O℃。其它MRM條件見表1。表15種頭孢菌素的定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、去簇電壓、碰撞氣能量
7、Table1Someparametersofmultiplereactionmonitoringdetectionfor5cephalothins2．3標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制準(zhǔn)確稱取每種頭孢菌素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，分別用水配制成濃度為1．0g／L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。取適量頭孢菌素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用空白樣品提取液配制成適當(dāng)濃度的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。2．4樣品處理稱取5g蜂蜜樣品于150mL三角瓶中，加入25mL磷酸鹽緩沖溶液溶解樣品，混勻，用5moL／LNaOH溶液調(diào)節(jié)至pH=8．5。把樣品溶液移至下接OasisHLB固相萃取柱的貯液器中，以3mL／min的
