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1、Livin和PCNA在尖銳濕疣組織中的表達(dá)和意義尖銳濕疣(condylomaacumillata,CA)是由人類乳頭瘤病毒(Humanpapilloma說ms，HPV)感染引起的多發(fā)于生殖器部位的良性乳頭瘤樣增生,臨床上增生快，治療后常易復(fù)發(fā)，且部分病例有轉(zhuǎn)化為惡性腫瘤的可能，這可能與CA存在細(xì)胞凋亡和增殖異常有關(guān)。為了探討CA的發(fā)病與細(xì)胞增殖和凋亡的關(guān)系，我們運(yùn)用免疫組化”法分別檢測hivin和PCNA蛋白在CA組織中的表達(dá)，以探討兩者在CA發(fā)生發(fā)展中的作用及其相互關(guān)系。1對(duì)象與方法1.1對(duì)象收集48例CA
2、患者的外陰皮損組織標(biāo)本,其中男30例，女18例;年齡16?69歲，平均％?8歲;病程15?90天，平均蝎。4天;均經(jīng)組織病理學(xué)確診。取材前均未接受免疫性藥物、激光、冷凍等治療，且無其他系統(tǒng)疾病。對(duì)照組為10例手術(shù)室手術(shù)切除的正常成年男性包皮組織,均經(jīng)組織病理學(xué)證實(shí)為正常上皮。所有標(biāo)本經(jīng)4%多聚甲醛國定，石蠟包埋，連續(xù)作4um厚度切片后覆于用多聚賴氨酸處理過的玻片上，60°C烤箱烤片4h以上,備用。1.2方法免疫組化SP法檢測Linvin蛋口和PCNA蛋口的表達(dá)。兔抗Livin多克隆抗體(濃縮型)、PCNA鼠抗
3、人單克隆抗體、通用型叩檢測試劑盒均購于北京博奧森牛:物有限公司,DAB酶底物顯色劑購自北京中杉生物有限公司。操作步驟均按試劑盒說明進(jìn)行，抗體工作液Livin為1:80o所有切片染色均釆用相同條件，每批染色均設(shè)陽性對(duì)照、陰性對(duì)照。陽性對(duì)照用已知染色陽性的組織切片，陰性對(duì)照以PBS代替一抗孵育組織切片。1.3結(jié)果判定Livin陽性顯色為棕黃色顆粒，主耍為胞質(zhì)著色，少量胞核著色,PCNA陽性顯色為棕黃色顆粒，丄要為胞質(zhì)著色。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)，根據(jù)組織切片中陽性細(xì)胞百分比和著色強(qiáng)度進(jìn)行半定量分級(jí)評(píng)分。陽性細(xì)胞百分比口
4、0%為0分,10%?25%為1分,25%?50%為2分,50%?75%為3分,>75%為4分。著色強(qiáng)度：0分為不著色;1分為淺黃色;2分為黃色;3分為棕黃色。取上述兩項(xiàng)分值的乘積作為總積分:0分為陰性(?),1?4分為弱陽性什),6?8分為陽性(++),9?12分為強(qiáng)陽性什++)。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，采用x2檢驗(yàn)和Speaman相關(guān)檢驗(yàn)分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1CA組織中Livin蛋白表達(dá)陽J性反應(yīng)大多定位于胞膜和胞膜附近的胞漿，多呈黃色，
5、棕黃色至棕褐色著色。陽性細(xì)胞多呈魚網(wǎng)狀分布于隸層的屮、上部和顆粒層。2.2CA組織中PCNA蛋口的表達(dá)PCNA蛋白陽性定位于胞核。陽性著色大多呈棕色，棕褐色至深褐色。陽性細(xì)胞大多彌散分布于基底層及棘層的下部,棘層的中上部和顆粒層也有少量表達(dá)。多數(shù)正常上皮細(xì)胞大多呈條帶狀分布于基底層,陽性著色大多呈淡棕色至深棕色.在CA組織屮,39例Livin表達(dá)陽性組織屮,PCNA全部表達(dá)陽性;9例Livin表達(dá)陰性組織中，有5例PCNA呈陽性表達(dá)，經(jīng)直線相關(guān)分析顯示二者表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)(r=0.59?P<0.01)o3討論
6、越來越多的資料表明，腫瘤不僅是增殖、分化異常的疾病,同時(shí)也是凋亡異常的疾病。細(xì)胞的凋亡與增殖同良惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。尖銳濕疣是一種良性乳頭瘤樣增生，已有研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡和增殖異常在CA的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。Livin是近年來發(fā)現(xiàn)的一種新的凋亡抑制蛋白(inhibitorofapoptosisprotein,IAP)家族成員，該蛋白是從人類基因組t-DNA文庫中克隆得到，因其從人的胎腎cDNA文庫屮發(fā)現(xiàn)，又被命名為KIAP(kidneyinhibitorofapoptosisprotein)[5]
7、,特異的高表達(dá)丁某些實(shí)體腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞系，能抑制許多凋亡刺激劑誘發(fā)的細(xì)胞凋亡，提示該基因可能在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起著重耍作用。本實(shí)驗(yàn)中我們應(yīng)用免疫組化檢測CA組織中h說n的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CA組織中IIVin陽性表達(dá)率及陽性表達(dá)強(qiáng)度均高于正常上皮，說明其參與CA的發(fā)病。以往研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)IIV血是一種凋亡抑制蛋白,其可能直接通過抑制制caspase的細(xì)胞凋亡途徑，抑制細(xì)胞凋亡，間接導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)目增加，從而使疣體過度增生，參與CA的發(fā)生、發(fā)展。PCNA增殖細(xì)胞核抗原(Proliferatingcellnuclea
8、rantigen,PCNA)是反映細(xì)胞增殖活性的重耍標(biāo)志之一。本研究結(jié)果顯示，尖銳濕疣組織中PGNA陽性表達(dá)率及陽性表達(dá)強(qiáng)度均高于止常上皮，呈明顯高表達(dá),提示CA組織屮細(xì)胞增殖活躍。本研究還發(fā)現(xiàn)，相比較Livin蛋白表達(dá)陰性組織,PCNA標(biāo)記指數(shù)在Livin蛋口表達(dá)陽性組織中較高。而隨著Livin蛋口陽性表達(dá)越強(qiáng)，PCNA標(biāo)記指數(shù)也越高，統(tǒng)計(jì)分析證實(shí)Livin蛋白的表達(dá)與PCNA標(biāo)記指數(shù)呈止相關(guān)，有
