植物磷含量測(cè)定(艾老師).doc

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1、植物有效磷含量的測(cè)定（游離態(tài)磷）1．試劑配制（1）配100mll0%(w/v)的高氯酸，取7.874ml72%的高氯酸溶液。(高氯酸：分子量100.46，相對(duì)密度1.764)。配800ml5%(w/v)的高氯酸，取31.494ml72%的高氯酸溶液。（2）配制硫酸-鉬酸銨溶液（溶液A）：即0.5NH2SO4中含有0.4%（w/v）的鉬酸銨。①溶解0.8g鉬酸銨(NH4)6Mo7O24·4H2O于100ml水中。②然后徐徐加入5ml的濃H2SO4（98%）。③充分混勻，冷卻后加水至200ml。（3）配制10%(w/v)抗壞血酸溶液（溶液B）：溶解2g抗壞血酸于水

2、中，最后加水至20ml中，貯于棕色瓶中，在4℃冰箱保存。（4）工作溶液：按體積比6:1混合溶液A和溶液B。注：工作溶液需要每天配制，配好后放置2小時(shí)后再使用。2.操作步驟（1）取0.5克鮮樣用液氮研磨成粉末，在4℃放置(冰上或者冰箱)至樣品凍融，加入1ml10%(w/v)的高氯酸（PCA）研磨均勻。（2）勻漿液用5%(w/v)的高氯酸（PCA）稀釋10倍，于冰上放置30分鐘。（3）于4℃，10000g離心10分鐘，上清液用于有效磷含量的測(cè)定（鉬藍(lán)法）。（4）取2ml工作溶液與1ml樣品上清液混合，于40℃溫育20分鐘。（5）反應(yīng)液在冰上冷卻后，于820nm可見(jiàn)

3、光波長(zhǎng)下測(cè)定吸收值。如樣品濃度過(guò)高，應(yīng)適當(dāng)稀釋，使其OD值落在標(biāo)線的線性范圍內(nèi)。3．磷標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作（1）磷標(biāo)準(zhǔn)溶液配制（60ppmP）：溶解0.230g磷酸二氫銨（NH4H2PO4）于100ml蒸餾水中，即得600ppmP的磷標(biāo)準(zhǔn)溶液，再將600ppmP的磷標(biāo)準(zhǔn)溶液用提取劑稀釋10倍，得60ppmP的磷標(biāo)準(zhǔn)溶液。（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：將60ppmP的標(biāo)準(zhǔn)磷溶液用提取劑稀釋，分別制成0.6、1.2、2.4、3.6、4.8和6ppmP的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。提取劑用10%(w/v)的高氯酸和5%(w/v)的高氯酸按體積比1:9混合配制。用提取劑與工作溶液的反應(yīng)液作空白。4

4、.計(jì)算植物有效磷(Pi)含量(mgPi/gFW)=OD值*(V/m)*(V2/V1)*COD值—換算后待測(cè)液中磷的質(zhì)量濃度(PPM：mg/L)V—樣品制備溶液的ml數(shù)，即樣品所加提取劑的體積(此為0.01L)m—樣品鮮重(g)(根據(jù)實(shí)際稱得的質(zhì)量計(jì)算)V1—吸取反應(yīng)所用體積(1ml)V2—反應(yīng)液總體積數(shù)(3ml)C—樣品的稀釋倍數(shù)(如果樣品濃度過(guò)高，需稀釋至1ml后再反應(yīng))二十、植物總磷的測(cè)定1.試劑配制（1）二硝基酚(2,6-或2,4-)：溶解二硝基酚0.25g100ml水中。此指示劑的變色點(diǎn)約為pH3，酸性時(shí)無(wú)色，堿性時(shí)呈黃色。（2）4mol/L氫氧化鈉溶

5、液：溶解NaOH16g于100ml水中。（3）2mol/L（1/2H2SO4）溶液：吸取濃硫酸6ml，緩緩加入80ml水中，邊加邊攪動(dòng)，冷卻后加水至100ml。（4）酒石酸銻鉀溶液：稱取酒石酸氧銻鉀[K(SbO)C4H4O6]0.5g，溶解于100ml水中，制成0.5%的溶液。（5）鉬銻混合液：另取鉬酸銨[(NH4)6Mo7O24·4H2O]10g溶于450ml水中，徐徐加入153ml濃硫酸，邊加邊攪拌。再將0.5%的酒石酸銻鉀溶液100ml加入到鉬酸銨溶液中，最后加水至1L，充分搖勻，貯于棕色瓶中。（6）鉬銻抗試劑：臨用前（當(dāng)天），稱取1.5g左旋抗壞血酸，

6、溶于100ml鉬銻混合液中，混勻。有效期24個(gè)小時(shí)，如藏于冰箱中則有效期較長(zhǎng)。此試劑中H2SO4為5.5mol/L，鉬酸銨為10g/L，酒石酸銻鉀為0.5g/L，抗壞血酸為15g/L。2．操作步驟（1）稱取植物樣品(約0.1450g～0.1550g，已用剪刀剪碎)，置于消煮管中。（2）然后加入濃H2SO48mL輕輕搖勻。（3）瓶口放一小漏斗，在電爐上消煮，300℃，30分鐘。（4）當(dāng)溶液加熱至微沸并全部呈棕黑色時(shí)取下，加10滴H2O2。（5）再加熱至微沸，5～10分鐘，取下。（6）稍冷后重復(fù)加H2O25～10滴，再消煮。（7）如此重復(fù)2～3次，每次添加的H2O

7、2應(yīng)逐次減少。（8）消煮到溶液呈無(wú)色或清亮后，再加熱約5～10min，以除盡剩余的H2O2，關(guān)閉電爐，讓其自然冷卻30分鐘后，取下，繼續(xù)冷卻。（9）用少量水沖洗漏斗，洗液流入消煮管，將消煮液定量地移入50ml容量瓶中，搖勻，冷卻至室溫。（10）用蒸餾水定容，用濾紙過(guò)濾到50ml離心管中，供磷的測(cè)定(鉬銻抗比色法)。（11）吸取消煮液4ml注入50ml容量瓶中(根據(jù)樣品濃度調(diào)整反應(yīng)液數(shù)量)，加水至約30ml。（12）加二硝基酚指示劑2滴，滴加4NNaOH溶液直至溶液變?yōu)辄S色。（13）再加2NH2SO4數(shù)滴，使溶液的黃色剛好褪去。（14）然后加鉬銻抗試劑5ml，加

8、水定容至50ml。搖勻，30min后，