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1、氣相色譜法測(cè)定血清中丙戊酸鈉濃度主講人：毛瓊瓊2012年3月30日彭海洲宋飛丙戊酸鈉簡(jiǎn)介分析背景分析步驟思考題謝謝觀看參考文獻(xiàn)丙戊酸鈉常用劑型原發(fā)性大發(fā)作和失神小發(fā)作的首選藥廣譜抗癲癇藥片劑：200mg規(guī)格糖漿劑：300ml規(guī)格注射劑:每瓶?jī)?nèi)含400mg近白色的無(wú)菌丙戊酸鈉凍干粉,隨附1支4ml注射用水丙戊酸鈉SodiumValproate別名抗癇靈丙戊酸鈉簡(jiǎn)介分析背景分析步驟思考題謝謝觀看參考文獻(xiàn)分析背景監(jiān)測(cè)方法很多,目前以免疫測(cè)定法高效液相色譜法(HPLC)等缺點(diǎn)找一種分析方法可以滿足臨床檢測(cè)血丙戊酸鈉濃度的要求臨床上使用的大多數(shù)抗癲癇藥物,均
2、需要進(jìn)行治療藥物監(jiān)測(cè)(TDM)抗癲癇藥物丙戊酸鈉操作程序復(fù)雜,分析流程長(zhǎng),費(fèi)用昂貴,不利于臨床推廣應(yīng)用。藥物分析人員氣相色譜法GC測(cè)定血清中丙戊酸鈉濃度丙戊酸鈉簡(jiǎn)介分析背景分析步驟思考題謝謝觀看參考文獻(xiàn)1、材料與方法2、結(jié)果儀器與試劑樣品處理色譜條件GC對(duì)血清中丙戊酸鈉濃度分析步驟3線性關(guān)系與檢測(cè)限精密度回收率討論GC-15A氣相色譜儀,氫火焰檢測(cè)器,C2R4A色譜工作站(shimadzu產(chǎn)品)、LXJ2Ⅱ離心沉淀機(jī)(上海醫(yī)療器械三廠)儀器樣品儀器與試劑丙戊酸鈉提取液丙戊酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液試劑高純氮?dú)夂透呒儦錃?。硫酸、三氯甲?長(zhǎng)沙試劑公司),丙戊酸鈉(
3、VPA)、苯酚(Phenol,Sigma公司產(chǎn)品)。GC-15A氣相色譜儀氫火焰檢測(cè)器離心沉淀機(jī)樣品處理色譜條件取3ml全血于5ml速凝管內(nèi),離心,取上層血清0.5ml于5ml的玻璃離心管內(nèi),加50μl5mol/L的H2SO4和0.5ml提取液,加蓋,振蕩提取1min,3000r/min離心5min。取1μl氯仿液于氣相色譜儀上進(jìn)樣(圖1～圖4)。從圖1可知,6min保留時(shí)間(RT)便可以完成血清丙戊酸鈉濃度的檢測(cè)爐溫170℃,氫火焰檢測(cè)器溫度220℃,進(jìn)樣器溫度220℃,氫氣流速40ml/min,氮?dú)饬魉?5ml/min,空氣流速500ml/mi
4、n線性關(guān)系與檢測(cè)限取10μg/ml的丙戊酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液,用空白血清進(jìn)行稀釋后,按標(biāo)本處理程序進(jìn)行操作，檢測(cè)限量為1μg/ml以標(biāo)準(zhǔn)物濃度(X)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)物峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積比值(Y^)進(jìn)行回歸分析,得回歸方程Y^=0.0121X+0.003和相關(guān)系數(shù)r=0.997精密度用1mg/ml的丙戊酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液,將空白血清制成濃度為:200,100,50,25,12.5,6.25,3.125,1.563和0.781μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)系列。各取0.5ml于5ml的玻璃離心管內(nèi),以下按標(biāo)本處理程序操作選3個(gè)高、中、低不同濃度范圍內(nèi)的樣品,每天測(cè)8次,連續(xù)測(cè)定3d回收率選3
5、個(gè)不同濃度的樣品,每毫升加入10～100μg的丙戊酸鈉,按標(biāo)本處理程序進(jìn)行操作,氣相色譜法測(cè)定血清中丙戊酸鈉的的平均回收率為98.56%～99.83%討論本研究中丙戊酸鈉和內(nèi)標(biāo)苯酚的峰距較大,不利于控制氣相色譜儀工作時(shí)各參數(shù)的微小變動(dòng)所產(chǎn)生的誤差。建立氣相色譜法定量測(cè)定血清中抗癲癇藥丙戊酸鈉濃度的關(guān)鍵,在于尋找合適的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。為注意將收集到的臨床標(biāo)本置于4℃冰箱中保存,實(shí)驗(yàn)證明此條件下,一周內(nèi)對(duì)樣品的測(cè)定結(jié)果沒(méi)有影響在加入丙戊酸鈉提取液,離心時(shí)常常由于樣品中蛋白質(zhì)含量過(guò)高,仍不能分離,此時(shí)可用微量加樣器沿壁攪動(dòng),再離心,以達(dá)到分離的效果。使用微量
6、進(jìn)樣器時(shí),應(yīng)該保持干燥,否則會(huì)使測(cè)定的峰變寬,延遲出峰時(shí)間參考文獻(xiàn)[1]朱伊.高效液相色譜法測(cè)定人血清中丙戊酸鈉含量分析[J].福建醫(yī)藥雜志,2001,23(4):1272128.[2]陳堅(jiān),方維軍,吳芳,等.高效液相色譜法測(cè)定丙戊酸血藥濃度[J].上海醫(yī)院藥學(xué),2000,11(3):33235.[3]程玲,羅雯紅,李慧,等.高效液相色譜法測(cè)定癲癇病人血清中丙戊酸的濃度[J].汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2000,13(3):73274.[4]張敬軍,俞麗云,瞿治平.高效液相色譜法測(cè)定癲癇病人血清中丙戊酸的濃度[J].中華神經(jīng)科雜志,1999,32(1):
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