同種瓣論文:不同濃度海藻糖對液氮深低溫保存同種帶瓣大動脈組織的保護(hù)作用及其對caspase-3表達(dá)的影響

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1、同種瓣論文:不同濃度海藻糖對液氮深低溫保存同種帶瓣大動脈組織的保護(hù)作用及其對caspase-3表達(dá)的影響【中文摘要】觀察海藻糖作為冷凍保護(hù)劑凍存同種帶瓣大動脈組織,尋求最佳的冷凍保護(hù)劑并探討冷凍保護(hù)劑的最佳適宜濃度以及帶瓣大動脈組織caspase-3的表達(dá)。方法在液氮中凍存時間點分為12個月,15個月,18個月,依據(jù)凍存液不同分為5組,分別是:0.1mol/LDMSO(對照組),0.1mol/L海藻糖(實驗組1),0.1mol/L海藻糖+0.1mol/LDMSO(實驗組2),0.2mol/L海藻糖+0.1mol/LDMSO(實驗組3),0.3m

2、ol/L海藻糖+0.1mol/LDMSO(實驗組4)。免疫組化光鏡觀察組織細(xì)胞凋亡,測定血糖濃度檢測組織細(xì)胞代謝情況。采用RT-PCR和WesternBlot方法分別測定Caspase-3的相對表達(dá)量。新鮮組作為陰性對照。結(jié)果隨著保存時間的延長,同種帶瓣大動脈組織和細(xì)胞破壞逐漸加重。光鏡下觀察,新鮮大動脈組織均為弱陽性,各組標(biāo)本與新鮮組織比較均有明顯改變(d=37-43,P<0.05)。各組之間除實驗組2和實驗組3比較無差異外(d=66-72,P>0.05)其余各組比較均有差異(d=0-42,P<0.05),細(xì)胞凋亡最輕的是新鮮組,較好的是實驗

3、組2和實驗組3,其次依次為實驗組4、實驗組1,凋亡最嚴(yán)重的是對照組。血糖測定,實驗組2和實驗組3無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.68>0.05),其余各組標(biāo)本有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(F=41-46,P<0.05),細(xì)胞代謝最旺盛的是新鮮組,較好的是實驗組2和實驗組3,其次依次為實驗組4、實驗組1,代謝最弱的是對照組。RT-PCR和Western-Blot,在每個時間點下(P<0.05),細(xì)胞凋亡最輕的是新鮮組,較好的是實驗組2和實驗組3,其次依次為實驗組4、實驗組1,凋亡最嚴(yán)重的是對照組。結(jié)論1、海藻糖對液氮保存帶瓣大動脈有較好的保護(hù)作用;2、0.1mol/

4、L海藻糖+0.1mol/LDMSO和0.2mol/L海藻糖+0.1mol/LDMSO聯(lián)合應(yīng)用,其保護(hù)效果好于0.3mol/L海藻糖+0.1mol/LDMSO以及單獨(dú)使用0.1mol/LDMSO和0.1mol/L海藻糖。3、海藻糖作為冷凍保護(hù)劑凍存同種帶瓣大動脈組織,最佳的保存方案是0.1mol/L海藻糖+0.1mol/LDMSO和0.2mol/L海藻糖+0.1mol/LDMSO。【英文摘要】Toobservetheeffectoftrehaloseascryoprotectantforpreservingaorticvalvehomograft

5、inliquidnitrogenontheirtissuesandseekthebestprotectiveagentsandtheirbestconcentrations,otherwise,detecttheexpressionofcaspase-3.MethodsTheaorticvalvehomograftwasdividedinto5groups,namely:0.1mol/LDMSO(controlgroup),O.lmol/Ltrehalose(experimentalgroup1),0.1mol/Ltrehalose+0.1mo

6、l/LDMSO(experimentalgroup2),0.2mol/Ltrehalose+0.1mol/LDMSO(experimentalgroup3),0.3mol/Ltrehalose+0.1mol/LDMSO(experimentalgroup4).Atthetimeof12months,15monthsand18monthsafterpreservedinliquidnitrogen,theexpressionofcaspase-3oftheaorticvalvehomograftwasmeasuredbythelightmicro

7、scopyRT-PCRandWesternBlot.Atthesametime,theglucoseconsumptionofeachgroupin24Hourswasdetectedtorepresentthecellmetabolism.Freshgroupwasanegativecontrolgroup.ResultsThelongerofthesamplesstored,theworseofthetissuesandcellsdestroyed.Inthelightmicroscopy,freshaortictissuewasdomin

8、ant.Comparewiththefreshgroup,eachgrouphadstatisticalsignificance(d=37~43,P<

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