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《液氮保存對人主動(dòng)脈瓣組織細(xì)胞活力的影響論文》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、液氮保存對人主動(dòng)脈瓣組織細(xì)胞活力的影響論文.freelo不同時(shí)間段的瓣膜組織細(xì)胞活力及組織培養(yǎng)細(xì)胞生長情況的變化，為臨床適用的人同種主動(dòng)脈瓣的適宜保存期限提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).方法選?。?8～35）歲健康成年男性腦死亡30min內(nèi)取材的主動(dòng)脈瓣膜20個(gè).依據(jù)保存時(shí)間分為10組，Ⅰ組為新鮮對照組，取材后直接供實(shí)驗(yàn)用，Ⅱ～Ⅹ組為冷凍保存組，分別為冷凍保存1，3，6.freelo的瓣膜，每組2個(gè)瓣膜共6個(gè)瓣葉.冷凍保存組各組瓣膜緩慢降溫（1℃min-1），液氮中保存，實(shí)驗(yàn)時(shí)進(jìn)行快速復(fù)溫.瓣葉剪為細(xì)小組織塊，一半置
2、入培養(yǎng)瓶中做組織培養(yǎng)，相差顯微鏡下觀察其組織細(xì)胞生長情況;另一半組織塊用胰酶消化，光鏡下做細(xì)胞計(jì)數(shù)并計(jì)算其細(xì)胞活力.結(jié)果Ⅰ組的組織細(xì)胞活力最高（93.8%），Ⅱ～Ⅹ組細(xì)胞活力均較Ⅰ組明顯減低（67.3%vs93.8%P0.05）;Ⅷ，Ⅸ，Ⅹ組細(xì)胞活力較Ⅱ～Ⅶ組瓣膜各組明顯減低（52.4%vs76.5%P0.05）.Ⅰ組組織細(xì)胞1o瓣膜組織細(xì)胞生長較新鮮瓣膜組稍晚，但組織細(xì)胞活力仍較高;液氮保存18～24mo瓣膜組織細(xì)胞活力明顯減低，組織細(xì)胞生長緩慢，因此瓣膜組織活性及瓣膜耐久性可能減低.據(jù)此可認(rèn)為，
3、人同種主動(dòng)脈瓣的適宜保存期限為15mo以內(nèi).Keyanaorticvalvescryopreservedinliquidnitrogenat-196℃.METHODST18to35yearsoldhealthyadultheartsinafterthedeterminationofbraindeath，GroupⅡtoGroupⅩorespectively.Thefreshvalvesinedimmediatelyafterprocurement.Allthecryopreservedvalvese
4、nm×1mm×1mm.Halfofthetissues-berofviableandnonviablecellsainingtissuesediumcontaining100mLL-1fetalcalfserumat37℃toobservethecapacityofcellproliferationonthe7thand28thday.RESULTSFreshvalvesseemedtohavethehighestcellsurvivalrateofallthegroups（93.8%）.Incry
5、opreservationgroups，thereGroupⅡtoGroupⅩshoGroupⅠ（67.3%vs93.8%P0.05）.ValvesfromGroupⅧ，ⅨandⅩshoGroupⅠtoGroupⅦ（52.4%vs76.5%P0.05）.CellsinGroupⅠgreofculturecontainerduringthefourthiddleofthesecondostpartofthecontainerbot-tom.InGroupⅧ，ⅨandⅩ，cellsberarkedlyd
6、ecreasedduringthefourthanaorticvalvetissues.Valvesthatarepreservedfor18ormoremonthshaveloaticdecreaseincellularcapacityofpro-liferation.Accordingtotheresultsofourexperiments，thedurabilityofvalvescryopreserved18ormoremonthsin內(nèi)取材的主動(dòng)脈瓣20個(gè).供體心臟均在腦死亡后30min內(nèi)
7、無菌取出，剪開心臟四腔，4℃生理鹽水沖洗3次，用3層無菌塑料袋盛入供心并逐層線扎，冰壺帶回，在無菌臺上修剪成帶瓣管道.實(shí)驗(yàn)分為新鮮瓣膜對照組（Ⅰ組）和冷凍保存組（Ⅱ～Ⅹ組）.對照組取材后不入液氮內(nèi)保存，瓣葉剪下后直接供實(shí)驗(yàn)用.冷凍保存組依據(jù)在液氮（（196℃）中保存時(shí)間分為Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ，Ⅵ，Ⅶ，Ⅷ，Ⅸ，Ⅹ組，分別為冷凍保存1，3，6，9，12，15，18，21，24mo的瓣膜.每組2個(gè)瓣膜共6個(gè)瓣葉.1.2方法修剪備用的帶瓣主動(dòng)脈管道浸入含低濃度抗生素和二甲基亞砜（DMSO）的RPMI1640營養(yǎng)
8、液中，3層無菌耐低溫塑料袋分別束扎，外裹錫箔袋，標(biāo)記時(shí)間后，置入4℃冰箱中2h，再置入液氮蒸氣中使瓣膜緩慢降溫，最后放入液氮中長期保存，降溫速率保持在1℃min-1左右.定期添加液氮，使瓣膜始終保持在-196℃.實(shí)驗(yàn)當(dāng)日取保存不同時(shí)間的帶瓣管道在37℃水浴箱中快速復(fù)溫5min，然后掀去包裹薄膜，再在37℃無菌生理鹽水中快速復(fù)溫，復(fù)溫中不斷輕柔翻動(dòng)帶瓣管道，使其各部位的溫度均勻上升.新鮮組瓣膜及冷凍復(fù)溫后各組瓣膜均在超凈工作臺上無菌取出，剪切瓣葉并觀察其大體形態(tài)，分切瓣
