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《樹突狀細胞的體外培養(yǎng)及其誘導的抗腫瘤免疫作用.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、樹突狀細胞的體外培養(yǎng)及其誘導的抗腫瘤免疫作用作者：張建芳，于文彬，徐修禮，蘇明權，馬越云，劉家云，丁振若【關鍵詞】樹突狀細胞關鍵詞:樹突狀細胞；LAK細胞;免疫治療摘要：目的建立體外培養(yǎng)擴增樹突狀細胞(DC)的方法，并觀察其誘導的抗腫瘤免疫作用?方法分離外周血單個核細胞，應用GM-CSF及TL-4誘導DC產(chǎn)生，用TNF-ci和PGE2促進其成熟，并用肺癌細胞系GLC-82可溶性抗原致敏?將成熟DC與自體LAK細胞混合培養(yǎng)(DC-LAK),用MTT法檢測DC-LAK細胞及LAK細胞對多種腫瘤細胞系的殺傷作用?
2、結果經(jīng)GM-CSF,IL-4,TNF-a,PGE2作用后，細胞表達CDla陽性率為71.0%,CD8350.0%,CD14陽性率低于10.0%,高表達HLA-I,HLA-II和CD45,為典型的DC表型特征.DC-LAK和LAK細胞對4種腫瘤細胞(GLC-82,A549,moser和MCF-7)的殺傷率，前者為84.7%,66.9%,49.3%和56.0%,后者為43.5%,31.3%,45.0%和32.4%.結論成功的誘導出具有典型形態(tài)特征及增強LAK細胞殺傷活性的DC.Tnvitrogeneration
3、ofhumanblooddendriticcel1sforactivetumorimmunotherapyAbstract:AIMToestablishamethodtoculturedendriticcelIsDCinvitroandtoobservetheanti-tumoreffectin-ducedbyDC?METHODSDendriticcellswerederivedfromPBMCstiniiilatedwithGM-CSFandIL-4andDCwerepulsedwithtumorsolu
4、bleantigenabstractedfromlungcan-cercelllineGLC-82.TNF-and卩GEZivereusedtoenhanceantigenpresentingab訂ityofDC.PhenotypeofDCwereana-1yzedthroughFACS?MatureDCwerecoculturedwithLAKcellsandthemixedcellswerenaniedDC-LAK?CytotoxicityofDC-LAKandLAKweremeasuredbyMTTa
5、ssay.RESULTSTheculturedDCexpressedHLA-I,HLA-IIandCD45andpositiveratesofCDla,CD83andCD14were71.0%,50.0%&ndlessthanl0.0%respectively.Ki11ingratesofDC-LAKandLAKtothefourcel1lines(GLC-82,A549,moserandMCF-7)were84.7%,66.9%,49.3%,56.0%and43.5%,31.3%,45.0%,32.4%r
6、espectively.CONCLUSTONDCthathavetypicalphenotypeandcouldbeenhancecytotoxityofLAKcouldbeinducedfromPBMCsuc-cessfully.近年來樹突狀細胞（DC）可有效地遞呈可溶性腫瘤抗原，增強機體對腫瘤的特異性免疫應答，并在臨床取得了成績[1,2].我們將外周血中貼壁的單個核細胞作為DC的前體細胞，聯(lián)合應用一組細胞因子誘導獲得了純度較高的人樹突狀細胞，并將之與LAK細胞結合，體外誘導產(chǎn)生了相對高效而特異的抗腫瘤免
7、疫作用.1材料和方法1.1材料基因重組人IL-4,TNF-ci和GM-CSF為Promega公司產(chǎn)品，PGE2購自Sigma公司，淋巴細胞分離液購自上海醫(yī)學試劑廠，兒-2為本?；蜓芯克a(chǎn)品，抗CDla-FITC和抗CD83-FITC購自晶美公司，HLA-I,HLA-II抗體及羊抗鼠-FITC購自北京邦定公司，酶聯(lián)免疫檢測儀為Labsystem產(chǎn)品;CD14/CD45雙色熒光標記抗體由西京醫(yī)院免疫科提供.肺癌A549為本?；A部免疫學教研室提供;乳腺癌MCF-7細胞引自軍事醫(yī)學科學院;大腸moser細胞、肺
8、癌GLC-82細胞為本室保留株.各細胞系均用含50mL・L-l小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，于37°C,50mL・L-lC02條件下常規(guī)培養(yǎng).1?2方法1?2?1腫瘤可溶性抗原提取收集腫瘤細胞于低滲條件下反復凍融4次，以5000r・min-l離心30min,取上清，用考馬斯亮藍染料結合法測定蛋白質含量，過濾后凍存?zhèn)溆?1.2.2DC及IJK細胞的制備以常規(guī)方法分離P
