實驗三 線粒體和液泡系的超活染色與觀察.doc

《實驗三 線粒體和液泡系的超活染色與觀察.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。

1、實驗三線粒體和液泡系的超活染色與觀察實驗目的一、觀察動、植物活細胞內(nèi)線粒體、液泡系的形態(tài)、數(shù)量與分布。二、學習一些細胞器的超活染色技術(shù)。實驗原理活體染色是指對生活有機體的細胞或組織能著色但又無毒害的一種染色方法。它的目的是顯示生活細胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)，而不影響細胞的生命活動和產(chǎn)生任何物理、化學變化以致引起細胞舶死亡?；钊炯夹g(shù)可用來研究生活狀態(tài)下的細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理、病理狀態(tài)。根據(jù)所用染色劑的性質(zhì)和染色方法的不同，通常把活體染色分為體內(nèi)活染與體外活染兩類。體內(nèi)活染是以膠體狀的染料溶液注入動、植物體內(nèi)，染料的膠粒固定、

2、堆積在細胞內(nèi)某些特殊結(jié)構(gòu)里，達到易于識別的目的。體外活染又稱超活染色，它是由活的動、植物分離出部分細胞或組織小塊，以染料溶液浸染，染料被選擇固定在活細胞的某種結(jié)構(gòu)上而顯色?；铙w染料之所以能固定、堆積在細胞內(nèi)某些特殊的部分，主要是染料的“電化學，，特性起重要作用。堿性染料的膠粒表面帶陽離子，酸性染料的膠粒表面帶有陰離子，而被染的部分本身也是具有陰離子或陽離子，這樣，它們彼此之間就發(fā)生了吸引作用。但不是任何染料皆可以作為活體染色劑之用，應選擇那些對細胞無毒性或毒性極小的染料，而且總是要配成稀淡的溶液來使用。一般是以

3、堿性染料最為適用，可能因為它具有溶解在類脂質(zhì)(如卵磷脂、膽固醇等)的特性，易于被細胞吸收。詹納斯綠B（JanusgreenB）和中性紅（neutralred）兩種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料，對于線粒體和液泡系的染色各有專一性。實驗用品一、器材顯微鏡、恒溫水浴鍋、解剖盤、剪刀、鑷子、雙面刀、載玻片、凹面載玻片、表面皿、吸管、牙簽、吸水紙。二、試劑1．Ringer溶液氯化鈉0.85g(變溫動物用0.65g)氯化鉀0.25g氯化鈣0.03g蒸餾水100ml2.10％、1／3000中性紅溶液稱取0.5g中性紅溶

4、于50mlRinger液，稍加熱(30~40'C)使之很快溶解，用濾紙過濾，裝入棕色瓶于暗處保存，否則易氧化沉淀，失去染色能力。臨用前，取已配制的1％中性紅溶液lml，加入29mlRinger溶液混勻，裝入棕色瓶備用。3．1％、1/5000詹納斯綠B溶液稱取50mg詹納斯綠B溶于5mlRinger溶液中，稍加微熱(30～40℃)，使之溶解，用濾紙過濾后，即為1％原液。取1％原液lml加入49mlRinger溶液，即成1/5000工作液裝入瓶中備用。最好現(xiàn)用現(xiàn)配，以保持它的充分氧化能力。三、材料1.小白鼠肝細胞。

5、2.人口腔上皮細胞。3.洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細胞。4.蟾蜍胸骨劍突軟骨細胞。5.小麥或黃豆幼根根尖。實驗方法一、線粒體的超活染色與觀察線粒體是細胞進行呼吸作用的場所，其形態(tài)和數(shù)量隨不同物種、不同組織器官和不同的生理狀態(tài)而發(fā)生變化。詹納斯綠B是毒性較小的堿性染料，可專一性地對線粒體進行超活染色，這是由于線粒體內(nèi)的細胞色素氧化酶系的作用，使染料始終保持氧化狀態(tài)(即有色狀態(tài))，呈藍綠色；而線粒體面圍的細胞質(zhì)中，這些染料被還原為無色的色基(即無色狀態(tài))。(一)人口腔粘膜上皮細胞線粒體的超活染色觀察1.取清潔載玻片放在37℃恒

6、溫水浴鍋的金屬板上，滴2滴1/5000詹納斯綠B染液。2.實驗者用牙簽寬頭在自己口腔頰粘膜處稍用力刮取上皮細胞，將刮下的粘液狀物放入載玻片的染液滴中，染色10～15min(注意不可使染液干燥，必要時可再加滴染液)，蓋上蓋玻片，用吸水紙吸去四周溢出的染液，置顯微鏡下觀察。3.在低倍鏡下，選擇平展的口腔上皮細胞，換高倍鏡或油鏡進行觀察?？梢姳馄綘钌掀ぜ毎暮酥車|(zhì)中，分布著一些被染成藍綠色的顆粒狀或短棒狀的結(jié)構(gòu)，即是線粒體。(二)小白鼠肝細胞線粒體的超活染色觀察1.用頸椎脫臼法處死小白鼠，置于解剖盤中，剪開腹腔，

7、取小白鼠肝邊緣較薄的肝組織一小塊，放入表面皿內(nèi)。用吸管吸取Ringer液，反復浸泡沖洗肝臟，洗去血液。。2.在干凈的凹面載玻片的凹穴中，滴加]／5000詹納綠B溶液，再將肝組織塊移人染液，注意不可將組織塊完全淹沒，要使組織塊上面部分半露在染液外，這樣細胞內(nèi)的線粒體酶系可充分得到氧化，易被染色。當組織塊邊緣被染成藍綠色即成(一般需染20~30min)。3.吸去染液，滴加Ringer溶液，用眼科剪將組織塊著色部分剪碎，使細胞或細胞群散出。然后，用吸管吸取分離出的細胞懸液，滴一滴于載玻片上，蓋上蓋玻片進行觀察。4.在

8、低倍鏡下選擇不重疊的肝細胞，在高倍鏡或油鏡下觀察，可見具有1～2個核的肝細胞質(zhì)中，有許多被染成藍綠色的線粒體，注意其形態(tài)和分布狀況。(三)洋蔥鱗莖表皮細胞線粒體的超活染色觀察1.用吸管吸取1/5000詹納斯綠B染液，滴一滴于干凈的載玻片上，然后，撕取一小片洋蔥鱗莖內(nèi)表皮，置于染液中，染色10～15min。2.用吸管吸去染液，加一滴Ringer液．注意使內(nèi)表皮組織展平，蓋上蓋玻片進行觀察