食用菌脫毒技術(shù).doc

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1、食用菌脫毒技術(shù)近年來，食用菌病害甚多，至今尚無有效、專用的防治藥物應(yīng)用于生產(chǎn)。將植物的脫毒技術(shù)應(yīng)用于食用菌生產(chǎn)，可有效抑制病害的發(fā)生。所謂植物脫毒，是將植物莖尖生長尖端組織進(jìn)行分離，將分離組織置于特定培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得脫離原體病毒、病菌的新生種苗。具體到食用菌的脫毒繁種，嚴(yán)格說來，一般的組織分離并不能達(dá)到使菌種脫毒的目的，這是由于子實體已生長至中后期，攜帶病毒、病菌的概率相當(dāng)高，故脫毒效果不明顯。而將食用菌尖端生長點進(jìn)行脫毒，效果理想。具體的脫毒方法有兩種：1?菌絲尖端脫毒技術(shù)宜使用規(guī)格為90毫米或110毫米的培養(yǎng)皿。無

2、此規(guī)格培養(yǎng)皿時，也可改用規(guī)格為25毫米x200毫米的大型試管，但操作不太方便。先按常規(guī)制備母種培養(yǎng)基，裝入三角瓶，棉塞封口，加皮紙包封；同時將培養(yǎng)皿洗凈后用牛皮紙包好。二者同時進(jìn)行滅菌處理。121°C下滅菌30分鐘，待滅菌鍋內(nèi)壓力為零時，取出滅菌物，放入事先消毒的接種箱。打開牛皮紙包封，一手持培養(yǎng)1111,一手持三角瓶，利用手指調(diào)控使培養(yǎng)皿上蓋開啟約1~2厘米，倒入培養(yǎng)基液體約10-20毫升,蓋嚴(yán)。將培養(yǎng)皿平置，冷卻后成一光滑平而，俗稱平板。平板冷卻至30°C以下時，接入待脫毒菌種。接種方法：挑取米粒大小的一塊種源，接入平板邊緣

3、。接種后置于規(guī)定溫度下培養(yǎng)（視品種調(diào)控溫度）。當(dāng)菌絲萌發(fā)至最長為2厘米時，用尖刃接種工具切取菌絲尖端1毫米左右，接入新制平板上。此為1次脫毒。一般可連續(xù)脫毒3~4次。脫毒次數(shù)越多,脫毒效果就越有保證。2?原基組織脫毒技術(shù)該技術(shù)最大程度革除了原有組織分離時子實體處于生長中后期，攜帶病毒、病菌可能性極大等弊端，真正實現(xiàn)了分離尖端組織的脫毒目的。具體操作為：常規(guī)配制基料，調(diào)破氮比為30：1o碳氮比不可小于25：1,以免菌絲過度旺盛生長結(jié)成菌皮，不易現(xiàn)原基。大口罐頭瓶洗凈、備用。準(zhǔn)備數(shù)塊又門厘米"1厘米的純棉紗布。裝料至瓶口下1厘米時，

4、從瓶口處鋪上一層紗布，用平口螺絲刀將紗布邊緣插至瓶下，使之緊貼瓶劈。封口滅菌、接種、培養(yǎng)等操作按常規(guī)進(jìn)行。待菌絲發(fā)滿瓶后，施行溫差、濕差、光照等刺激，一般約7天即可現(xiàn)出原基。此時原基的形態(tài)是白疙瘩。待原基高至1厘米時，即可進(jìn)行脫毒分離。將菌瓶用75%酒精擦洗后，移入已消毒的接種箱，箱內(nèi)不再進(jìn)行常規(guī)熏蒸。同時準(zhǔn)備接種針（或接種釣）、多個刀片（以備交替使用），與菌瓶一同放入接種箱中，噴灑新潔爾滅以確保無菌操作。兩手用75%酒精擦洗，仲入接種箱，將刀片進(jìn)行灼燒滅菌后手持冷卻。打開菌瓶封口,兩手配合用無菌銀子取出原基。由于料面覆蓋一層紗

5、布，故不會將基料帶出，操作方便。用刀片將原基表層削去約1毫米，然后用尖刃刀片將原基劃切，使每塊大小1毫米2左右。用接種針將分離的原基塊移入平板或大型試管進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)。操作要點：一是用刀片進(jìn)行削、切時，每切一刀須更換一次刀片；二是分離塊接入時須靠邊緣投放，可接在平板的邊緣或試管的最前部，一般不居中接入。