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《戊型肝炎病毒衣殼蛋白同源二聚體的相互作用結(jié)構(gòu)域.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、!"卷#期生物工程學(xué)報%&’(!")&(#!""$年#月!"#$%&%’()*$+,(-.#(/%0"$(,(12*+,-+./!""$!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!戊型肝炎病毒衣殼蛋白同源二聚體的相互作用結(jié)構(gòu)域李少偉何志強(qiáng)王穎彬陳毅歆劉如石林鑒顧穎張軍夏寧邵"（廈門大學(xué)細(xì)胞生物學(xué)與腫瘤細(xì)胞工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗室，廈門02#""7）摘要為了探討戊型肝炎病毒衣殼蛋白同源二聚體形成的關(guān)鍵區(qū)域和相互作用結(jié)構(gòu)域，以及二聚
2、體形成與主要天然中和表位的形成之間的關(guān)系，通過末端缺失、定點(diǎn)突變技術(shù)研究戊型肝炎病毒（C:%）DE4!的++08$1++2"2片段):!的聚合現(xiàn)象，發(fā)現(xiàn)其F端的++78G1++2"（!H%H%IH）疏水區(qū)是該片段同源聚合的核心區(qū)域，提高該區(qū)域氨基酸的親水性將妨礙聚合現(xiàn)象的發(fā)生；半胱氨酸化學(xué)交聯(lián)實(shí)驗表明):!形成同源二聚體時，++78G在空間位置上相接近，處于可生成化學(xué)鍵的距離，提示所處區(qū)域為疏水聚合的作用結(jié)構(gòu)域；通過J’+=K程序估算核心區(qū)域的天然突變率，發(fā)現(xiàn)其疏水性高度保守；)端缺失實(shí)驗表明，至少27個
3、氨基酸既不影響同源聚合也不直接參與主要的天然中和表位的形成，但可協(xié)助中和表位構(gòu)象的形成，而這種協(xié)助作用可被DE4!的末端肽段所代替。++78G1++2"!（H%H%IH）疏水區(qū)為戊肝病毒衣殼組裝的第一步驟的核心區(qū)域，并與重要的天然中和表位的形成直接相關(guān)，從而為戊肝病毒疫苗的研究提供更詳細(xì)的信息。關(guān)鍵詞戊型肝炎病毒，DE4!，基因突變，同源聚合，作用結(jié)構(gòu)域中圖分類號L2#G文獻(xiàn)標(biāo)識碼H文章編號#"""10"2（#!""$）"#1""8"1"8戊型肝炎病毒（C:%）是一種無包膜、二十面體!材料與方法對稱結(jié)構(gòu)的
4、E)H病毒，其基因組包含0個開放讀碼框架（DE4），其中DE4!編碼22"個氨基酸的結(jié)構(gòu)蛋!"!質(zhì)粒與菌種白（MDE4!），組成病毒衣殼。在過去的研究中，我們含有C:%DE4!++08$1++2"2基因片段的非融合［0］［#］在大腸桿菌中表達(dá)了DE4!的++08$1++2"2的重組蛋表達(dá)載體N5D15G1:!及N5D15G為本實(shí)驗室所構(gòu)白（):!），發(fā)現(xiàn)其溶液可形成從二聚體到至少六聚建與保存，含有C:%DE4!++08$1++22"基因的質(zhì)粒體的多種聚體，二聚體形式的多肽與戊型肝炎病人NO:P1!"51D
5、E4!Q#由香港大學(xué)吳文翰教授惠賜，受急性期和恢復(fù)期血清及中和單抗的反應(yīng)性均顯著優(yōu)體菌3(0(,#:E!722購自)6R:,@’+,AJ<&’+S=公司。于其單體形式，提示其較好地模擬了衣殼蛋白組裝!"#引物［#］成病毒衣殼時的結(jié)構(gòu)狀態(tài)。用該重組蛋白免疫恒根據(jù)N5D15G1:!上C:%DE4!基因序列，定點(diǎn)河猴，可以產(chǎn)生高效價的抗C:%抗體，并可保護(hù)免突變時，盡可能選用3(0(,#的嗜性密碼子，由上海［$］疫猴在大劑量C:%攻擊下仍不出現(xiàn)任何肝炎癥狀，博亞公司合成。:!基因兩端的引物為：7T端引物提示):
6、!蛋白的折疊方式與C:%衣殼蛋白的天然C:4M（7T1B+K+K@B+@BK@KKBK+BKBKB@KB10T），0T端引物C:EM［!］折疊方式較為接近。):!形成的二聚體可被尿素（7T1BKB@+@+++K+++BK+K++BKBBB@+10T）。其它引物序列如或熱處理所解聚，而且序列中不含半胱氨酸，不可能表#、表!和表0所示。形成二硫鍵，提示疏水相互作用對):!二聚體的形!"$工具酶及其它成具有關(guān)鍵作用。本研究通過疏水性分析、肽段末限制性核酸內(nèi)切酶、4+5U)H聚合酶和NVU#31端缺失、氨基酸定點(diǎn)
7、突變、半胱氨酸的化學(xué)交聯(lián)實(shí)驗5載體為5+W+E+產(chǎn)品，酶標(biāo)記抗體購自晶美公司，和生物信息學(xué)等手段，進(jìn)一步研究):!蛋白二聚體為MED5DX產(chǎn)品，預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)和藍(lán)染試劑形成的關(guān)鍵區(qū)域和發(fā)生同源聚合的作用結(jié)構(gòu)域，以為C/F’&,6M<6.B6公司產(chǎn)品。及二聚體形成與主要免疫表位的形成之間的關(guān)系。收稿日期：!""01"21#!，修回日期：!""01"31##。基金項目：福建省科技重大項目（)&(!""!4"#0），教育部跨世紀(jì)優(yōu)秀人才培養(yǎng)計劃（!""!）。"通訊作者。56’：32178!1!#3$##"；
8、4+9：32178!1!#3$##"；:1;+<’：,=9<+>?<,@9<+,(9;-(6A-(B,1期李少偉等：戊型肝炎病毒衣殼蛋白同源二聚體的相互作用結(jié)構(gòu)域41表!"#$%端缺失的引物粒#EO6E;6K（0圖1）為模板，根據(jù)表1和表,所列引&’()*!&+*,-./*-012"#$%34*-/.5’)6*)*4.15物，其中3端缺失的8-端引物均與LKN!引物配對、!"#$%&"’()*$%(+,-!.%/".C端缺失的
