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1、2009年第5期SSR標(biāo)記在蘋果種質(zhì)資源及遺傳育種研究中的應(yīng)用王娟，宋尚偉(河南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，河南鄭州450002)摘要：SSR標(biāo)記作為一種有效的分子標(biāo)記手段，被廣泛地應(yīng)用于蘋果種質(zhì)資源和遺傳育種研究中。對其在蘋果種質(zhì)資源保存、品種鑒定、遺傳多樣性、遺傳連鎖圖譜構(gòu)建、基因標(biāo)記及定位等方面的應(yīng)用做了簡要概述。關(guān)鍵詞：蘋果；簡單序列重復(fù)；種質(zhì)資源；遺傳多樣性；遺傳連鎖圖譜中圖分類號：$661．1文獻標(biāo)識碼：A文章編號：1004—3268(2009)05—0016—05SSR(simplesequencerepeat)即簡單序列重1種質(zhì)資源保存復(fù)，通
2、常又稱為微衛(wèi)星(microsatellite)，指以少數(shù)幾個核苷酸(多數(shù)為2～4個，也有報道為1～6個口])種質(zhì)資源的收集和保存是遺傳育種工作的基為單位多次串聯(lián)重復(fù)的DNA序列『2]，長度一般在礎(chǔ)。但是，隨著種質(zhì)資源的不斷收集，種質(zhì)資源庫變2OObp以下。研究表明，微衛(wèi)星在真核生物基因組得越來越大，這給保存、評價、研究和利用種質(zhì)資源中的含量非常豐富，而且常常是隨機分布于核DNA帶來了眾多困難。為此，F(xiàn)rankel提出構(gòu)建核心中，不僅可以存在于內(nèi)含子中，也可以存在于編碼區(qū)種質(zhì)的設(shè)想，即用科學(xué)方法從整個種質(zhì)資源中選擇和染色體的其他任一區(qū)域。微衛(wèi)星中重復(fù)
3、單位的數(shù)一部分樣本，以最小的遺傳資源數(shù)量，最大限度地代表整個遺傳資源的多樣性。核心種質(zhì)的提出可解決目存在高度變異，這些變異表現(xiàn)為微衛(wèi)星數(shù)目的整豐富的遺傳資源材料的保存、評價、鑒定及利用帶來倍性變異或重復(fù)單位序列中的序列有可能不完全相的困難，并有利于管理、收集、種質(zhì)創(chuàng)新及資源的深同，因而造成多個位點的多態(tài)性[3．4]。在真核生物層次研究。Mcferson認為，分子標(biāo)記可以用于核中，大約每隔10～50kb就存在1個微衛(wèi)星，微衛(wèi)星心種質(zhì)的確定，以便以最少量的種質(zhì)資源最大限度序列兩側(cè)均為保守的DNA序列，因此可以利用和地代表資源的遺傳多樣性。Hokanso
4、nI1用SSR兩側(cè)區(qū)段互補的短序列引物通過PCR擴增重復(fù)序結(jié)合農(nóng)藝性狀建立了蘋果的核心種質(zhì)，并利用8個列本身，然后通過聚丙烯酰胺凝膠電泳(或瓊脂糖凝SSR引物檢測了66個蘋果品種(系)，以確定遺傳膠電泳)顯示DNA重復(fù)序列的多態(tài)性。同一性、估算遺傳穩(wěn)定性，結(jié)果在66個品種(系)中微衛(wèi)星起初只是作為探針，用于真核生物基因都發(fā)現(xiàn)了高水平變異，遺傳同一性數(shù)據(jù)產(chǎn)生了一個組的RFLP(restrictionfragmentlengthpolymor—遺傳相關(guān)性物候圖，并被地理起源以及所了解的家phism)研究。隨著PCR(polymerasechainrea
5、e—系信息所證實。tion)技術(shù)的建立，SSR迅速應(yīng)用于人類遺傳]和許2品種鑒定多動植物研究中[6～-。SSR標(biāo)記以其數(shù)量豐富、多態(tài)性高、重復(fù)性好、分布于整個基因組、特異位點擴蘋果栽培歷史悠久，種間雜交、無性繁殖容易，增、發(fā)生頻率高、共顯性遺傳等特性，已應(yīng)用于果樹導(dǎo)致個體差異不明顯，同名異種或同種異名現(xiàn)象普的品種鑒別、種質(zhì)資源管理、遺傳圖譜和系譜構(gòu)建以遍。用傳統(tǒng)的形態(tài)和同工酶鑒定品種，誤差大、效率及品種保護等方面的研究口]，在蘋果研究中的應(yīng)低，難以鑒定性狀相似的品種，分類標(biāo)準(zhǔn)也難以統(tǒng)用尤為廣泛一。為此，對SSR標(biāo)記在蘋果研究一。SSR標(biāo)記對品種的鑒
6、定實質(zhì)上是對基因型的中的應(yīng)用作一綜述。鑒定，使果樹品種鑒定和分類直接從DNA分子水收稿日期：2009一o3一Ol作者簡介：王娟(1984一)，女，河南新縣人，在讀碩士研究生，研究方向：果樹生物技術(shù)。通訊作者：宋尚偉(1965一)，男．河南滑縣人，副教授，主要從事果樹生理及生物技術(shù)研究。E—mail：songshw959@163．corn·16·河南農(nóng)業(yè)科學(xué)平上進行，準(zhǔn)確度高，效率高且信息量大，易于鑒別增出163個位點，其中多態(tài)性位點74個，每對引物同一物種的不同基因型，已成為一種有效的品種鑒的多態(tài)位點百分率為33．33％～63．16；將供試蘋定方法
7、。果品種分為四大類群，與傳統(tǒng)系譜分類基本一致，并Gianfranceschi等L1叩用陽性克隆篩選出16個初步建立了一個供試蘋果品種的SSR基因型圖譜新的蘋果SSR引物，通過在Florida、Iduna等21個庫，為建立中國蘋果品種的SSR基因型數(shù)據(jù)庫奠定蘋果品種上測試，16個引物中11個表現(xiàn)出了極好了基礎(chǔ)。高源等[3用SSR標(biāo)記對59份蘋果屬材料的重復(fù)性，并且利用其中的2個引物就能區(qū)分21個進行多態(tài)性分析，只用篩選出的其中3對引物即可品種。Guilford等利用(GA)和(GT)5作為探區(qū)分全部供試材料，通過聚類分析將59份蘋果屬材針篩選蘋果基因
8、組文庫，證明了這些重復(fù)序列的多料分為三大類群，即栽培品種、地方品種和新疆的野態(tài)性，同時開發(fā)了蘋果的14個SSR引物，僅用其
