《肺癌相關(guān)抗原RNA轉(zhuǎn)染樹突狀細胞誘導(dǎo)細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞殺傷活力的體外研究》.pdf

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1、醫(yī)技雜志2015年7月第22卷箜2J0塑￡￡墮￡iges!Y21!：22N011·695·肺癌相關(guān)抗原RNA轉(zhuǎn)染樹突狀細胞誘導(dǎo)細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞殺傷活力的體外研究湖南省懷化市第二人民醫(yī)院(41800O)劉伯軒戴北鴻向啟德廖東承高細強吳玉蘭周頻【摘要】目的研究NCI．H1975人肺腺癌細胞株相關(guān)抗原RNA轉(zhuǎn)染的人樹突狀細胞(DCs)在體外誘導(dǎo)細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞(CIK)對人肺腺癌細胞的殺傷活力。方法使用血細胞單采機采集外周血單個核細胞(PBMCs)并利用密度梯度離心法純化獲得的單個核細胞，細胞培養(yǎng)瓶貼壁獲得單核細胞，添加重

2、組人粒細胞、巨噬細胞集落刺激因子(rhGM—CSF)和重組人白細胞介素．4(rhIL．4)誘導(dǎo)為未成熟DCs，提取NCI．H1975細胞總RNA轉(zhuǎn)染DCs后誘導(dǎo)為成熟DCs。轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)后成熟DCs與PBMCs培養(yǎng)的CIK細胞混合培養(yǎng)后誘導(dǎo)，再次與靶細胞混合培養(yǎng)以觀察殺傷活力。實驗分轉(zhuǎn)染肺癌相關(guān)抗原RNA的DC—CIK組、未轉(zhuǎn)染DC—CIK組及轉(zhuǎn)染空脂質(zhì)體DC—CIK組，分別采用流式細胞分析法檢測DC及CIK細胞表面抗原表達、采用CSFE腆化丙啶(PI)熒光雙標(biāo)法檢測3組殺傷腫瘤活性的差異。結(jié)果轉(zhuǎn)染相關(guān)抗原RNA組、未轉(zhuǎn)染組及轉(zhuǎn)染空

3、脂質(zhì)體組的DC及CIK細胞表面抗原表達明顯上調(diào)，轉(zhuǎn)染相關(guān)抗原RNA組與其他2組對肺癌原代細胞殺傷活力明顯增強。結(jié)論肺癌相關(guān)抗原RNA轉(zhuǎn)染DC誘導(dǎo)CIK細胞對靶細胞的殺傷活力明顯增強，可為臨床應(yīng)用個體化DC．CIK細胞過繼免疫治療提供新的方法?！娟P(guān)鍵詞】樹突細胞；細胞因子誘導(dǎo)殺傷細胞；免疫療法，過繼；腺癌，細支氣管肺泡StudyoflungcancerassociatedantigenRNA-transfectedDC-inducedcellkiltingactivityofCIK／nvitroLiuBoxuan，DaiBeiho

4、ng，XiangQide，LiaoDongcheng，GaoXiqiang，WuYulan，Zhoun．PeoplesHospitalofHuaihuaC，HuI／M,／t418000，China【Abstract】objectiveToinvestigatetheNCI．H1975humanlungadenocarcinomacel1lineassociatedantigenRNA—transfectedhumandendriticcells(DCs)irtvitrocytokine—inducedkiller(CIK)act

5、ivityinducedkillercellstocancercells．MethodsUsingbloodcellapheresismachinecollectingperipheralbloodmononuclearcells(PBMCs)andusingmononuclearcellsbydensitygradientcentrifugationpurified，celcultureflasksadherentmononuclearcells，addingrecombinanthumangranulocyte—macrop

6、hagecolony—stimulatingfactor(rhGM—CSF)andrecombinanthumaninterleukin一4(rhlL一4)toinduceimmatureDCs，extractionoftotalRNANCI．H1975cellsweretransfectedDCsinducedtomatureDCs．Atiertransfectioni~ducematureDCsandPBMCsculturedCIKcellsinducedmixedculture，mixedculturewithtarget

7、cellsagaintoobservethedestructionofvitality．TheexperimentalpointsassociatedantigenRNA．transfectedDC．CIKgroupoflungcancer，non—transfectedDC—CIKgroupandtransfectedwithemptyliposomesDC—CIKgroupweredetectedbyflowcytometryanalysisDCandCIKcellsurfaceantigenexpression，using

8、CSFE／PIdoublestainingwasusedtodetectdifferencesinanti—tumoractivityofthethreegroups．ResultsRNA．a(chǎn)ssociatedantigentransfectedgroup，DC