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《大豆GmGBP1基因的原核表達及重組蛋白純化-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第31卷第6期大豆科學(xué)Vo1．31No．62012王E12月S0YBEANSCIENCEDec．2012大豆GmGBP1基因的原核表達及重組蛋白純化張彥威，劉麗雪，趙琳，谷月嬌，盧清瑤，宋仙萍，李文濱(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)大豆生物學(xué)教育部重點實驗室，東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)部大豆生物學(xué)與遺傳育種重點實驗室，黑龍江哈爾濱150030)摘要：將大豆中已克隆的一個新的s基因(GmGBP1)構(gòu)建到原核表達載體pGEX-6p一1上，導(dǎo)入大腸桿菌BL21(DE3)中，對其進行IPTG誘導(dǎo)。結(jié)果表明：在IPTG濃度為0．1mmol·L一，誘導(dǎo)時間為8h，誘導(dǎo)溫度為37℃
2、時，重組蛋白得到表達，分子量大約為95kDa，SDS—PAGE電泳結(jié)果表明重組蛋白主要以包涵體形式存在，用8mol·L尿素對其進行溶解后經(jīng)GST柱純化，得到較好的純化效果。關(guān)鍵詞：大豆；SKIP；原核表達；包涵體；純化中圖分類號：$565．1文獻標識碼：A文章編號：1000—9841(2012)06-0874—04ProkaryoticExpressionandProteinPurificationofSoybeanGmGBP1GeneZHANGYan—wei，LIULi—xue，ZHAOLin，GUYue-jiao，LUQing—yao，
3、SONGXian—ping，LIWen—bin(KeyLaboratoryofSoybeanBiologyinChineseMinistryofEducation，KeyLaboratoryofSoybeanBiologyandBreeding／GeneticsofChineseAgricultureMinistry，NortheastAculturalUniversity，Harbin150030，Heilongjiang，China)Abstract：AnewSPhomologinsoybeanwasconstructedintopro
4、karyoticexpressionvectorpGEX一6p一1andthentransformedintoE．colBI21(DE3)togettheexpressionproteinforfurtherstudy．Theresultindicatedthatan95kDarecombinantproteinwasexpressedwiththetreatmentof0．1mmol·LIGfor8hat37℃．therecombinantproteinwasconfirmedtomainlyexistedininclusionbodyf
5、ormbvSDS．PAGE．Thehigh—qualityrecombinantproteinwasobtainedthroughGSTcolumnpurificationaftertheinclusionbodywasdissolvedwith8mol·L—urea．Keywords：Soybean；SKIP；Prokaryoticexpression；Inclusionbody；Purification干旱、鹽堿、高溫等逆境嚴重制約著作物的產(chǎn)1材料與方法量水平，因此培育耐逆品種是擴大作物生長區(qū)域，維持作物穩(wěn)產(chǎn)、高產(chǎn)的重要手段。細胞活力被
6、認為1．1試驗材料是植物在逆境中生存的一個重要指標。很多研究大豆品種東農(nóng)42、原核表達載體pGEX．6p一1、表明植物激素脫落酸(ABA，Abscisicacid)在植物的大腸桿菌DH5c~菌株、大腸桿菌BI21(DE3)菌株均逆境脅迫反應(yīng)中起著重要的作用。SKIP(Ski—inter—由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)大豆研究所提供。pMD18一T、各種actingprotein)是真核生物中的轉(zhuǎn)錄共激活子，在轉(zhuǎn)限制性內(nèi)切酶和T連接酶均購自TaKaRa公司；錄和剪切中發(fā)揮保守的共激活作用。SKIP基因DNA凝膠回收試劑盒和質(zhì)粒提取試劑盒購自O(shè)me．在真核生物
7、中能夠調(diào)節(jié)細胞活力_2J，響應(yīng)植物的ga公司；低分子量蛋白Marker購自Solarbio公司；ABA信號并改善植物的抗逆水平J，并且相關(guān)研DNAMarker購自Transgen公司；GST融合蛋白純化究也表明大豆該基因能改善大豆對高溫和干旱的試劑盒(內(nèi)含GSHSepharose4B50％懸液、1XPBS耐性。因此，研究大豆SKIP基因(GenBank登陸和還原型GSH溶液)購自中科晨宇公司；其它藥品號：DQ112540)對大豆抗逆性狀的改良具有重要的或試劑均購自伊事達公司。理論和實際意義。1．2試驗方法本實驗室從大豆中克隆得到一個編碼SK
8、IP蛋1．2．1GmGBP1基因的擴增根據(jù)GmGBP1基因白的基因，命名為GmGBP1。為更好的在蛋白水平序列設(shè)計引物，并在其上下游引入酶切位點EcoRI上研究GmGBP1的功能
