大豆GmNAC8 基因克隆與原核表達(dá)-論文.pdf

《大豆GmNAC8 基因克隆與原核表達(dá)-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)(Jiangsul，．oy’Agr．Sci．)，2013，29(4)：734～737734http：／／wwW．jSnYxb．c0m劉曉慶，徐照龍，許玲，等．大豆GmNAC8基因克隆與原核表達(dá)[J]．江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2013，29(4)：734—737dot：10．3969／j．issn．1000-4440．2013．04．007大豆GmNAC8基因克隆與原核表達(dá)劉曉慶，徐照龍，許玲，黃益洪，何曉蘭，張大勇，馬鴻翔(江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究所／江蘇省農(nóng)業(yè)生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇南京210014)摘要：為了進(jìn)一步明確GmN

2、AC8基因的功能，設(shè)計(jì)帶有NdeI和XbaI雙酶切位點(diǎn)引物，從大豆根系cDNA中克隆到GmNAC8基因全長(zhǎng)ORF(Openreadingframe)，編碼蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為37000，理論等電點(diǎn)為6．43。將擴(kuò)增片段免隆至原核表達(dá)載體pCZN1，構(gòu)建重組質(zhì)粒pCZN1一GmNAC8，經(jīng)過酶切和PCR驗(yàn)證，并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)中，0．2mmol／LIPTG誘導(dǎo)后，經(jīng)SDS—PAGE電泳檢測(cè)獲得了目的蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)主要以包涵體的形式存在，通過鎳柱子純化獲得純化蛋白質(zhì)，然后利用His標(biāo)簽蛋白質(zhì)作為抗體進(jìn)行Western—blot

3、分析，證明所純化蛋白質(zhì)為目的蛋白質(zhì)。關(guān)鍵詞：GmNA；基因克隆；原核表達(dá)中圖分類號(hào)：$565．1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1000-4440(2013)04．0734-04CloningandprokaryoticexpressionofGmNAC8geneisolatedfromsoybeanLIUXiao—qing，XUZhao-long，XULing，HUANGYi—hong，HEXiao-lanZHANGDa—yong，，MAHong—xiang(InstituteAgro—biotechnology，JiangsuAcademy

4、ofAgriculturalSciences，ProvincialKeyLaboratoryofAgrobiology，Nanjing210014，China)Abstract：InordertofurtherdefnethefunctionofGmNAC8gene．thewholeopenreadingflarecofGmNAC8WasclonedfromsoybeanrootswiththeprimerscarryingNdeIandXbaIrestrictionsites．encoding283amim)acidswithaeal

5、cu—late(1mo]ecularmassof37000andatheoretiealpIof6．43．ThefragmentwastransformedintoaprokaryoticexpressionvectorpCZN1．AfterdigestionandPCRverification，therecombinantplasmidpCZN1一GmNAC8wasintroducedintoEscherichiacoliBI21(DE3)．SDS—PAGEanalysisshowedthatthefusionproteininduc

6、edwith0．2mm0L／LIPrGwassueeessfunvexpressedinE．colBL21(DE3)．a(chǎn)ndexistedmainlyinformofinclusionbodies．ThespecificreactionofNiresinpurifiedDroteinex—pressedinprokaryoticcellswithHistagproteinrevealedbywestern—blotanalysisconfirmedthetargetprotein．Keywords：GmNAC8；genecloning；

7、prokaryoticexpressionNAC轉(zhuǎn)錄因子是植物特有的一類轉(zhuǎn)錄因子，該家族轉(zhuǎn)錄因子的一個(gè)共同特點(diǎn)是N端為收稿日期：2013-02*28基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目[31101166、30971798]；江蘇省農(nóng)保守的大約150個(gè)氨基酸的NAC結(jié)構(gòu)域，C端為高業(yè)科技自主創(chuàng)新基金項(xiàng)目[CX(12)5021]；江蘇省自然科度變異的轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)。。它們?cè)谥参锷L(zhǎng)發(fā)學(xué)壤金項(xiàng)目(BK2010474)；國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目育、激素調(diào)節(jié)和抵御逆境等方面發(fā)揮著重要(2011BAI)35B06—3-4)的作用。NAC可以通過與靶標(biāo)基因啟動(dòng)子中

8、特定作者簡(jiǎn)介：劉曉慶(1982一)，女，江蘇如皋人，博士，助理研究員，主要的DNA序列結(jié)合，激活或抑制靶標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄表從事植物抗逆機(jī)制研究。(Te1)025．84391105；(E．mail)li．uxia