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《栽培大豆Rubisco小亞基基因（rbcS）全長cDNA的克隆及原核表達(dá)-論文.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、中國油料作物學(xué)報(bào)2014，36(3)：329—333ChineseJournalofOilCropSciencesdoi：10．7505／j．issn．1007—9084．2014．03．006栽培大豆Rubisco小亞基基因(rbcS)全長cDNA的克隆及原核表達(dá)崔喜艷，董雅致。，劉曉慶，張治安(1．吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，吉林長春，130118；2．吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，吉林長春，130118)摘要：根據(jù)NCBI中發(fā)表的大豆Rubisco小亞基基因(rbcS)序列(AF303939—1)設(shè)計(jì)
2、特異引物，以吉農(nóng)13大豆為實(shí)驗(yàn)材料，采用Trizol法提取葉片總RNA，通過RT—PCR克隆大豆rbcS的cDNA。將該基因與原核表達(dá)載體pET一30a(+)連接。轉(zhuǎn)化大腸桿菌E．coliBL21感受態(tài)細(xì)胞，雙酶切鑒定后篩選陽性克隆，測序結(jié)果顯示：rbcS全長696bp，其中開放閱讀框?yàn)?37bp，編碼178個氨基酸；選擇含大豆rbcScDNA陽性克隆菌液IPTG誘導(dǎo)，經(jīng)SDS—PAGE分析，誘導(dǎo)表達(dá)出分子量為29．1kDa的融合蛋白，表達(dá)產(chǎn)物大小與預(yù)計(jì)理論值相符。誘導(dǎo)7h蛋白表達(dá)量最高，為64
3、．15％。關(guān)鍵詞：栽培大豆；rbcS；基因克?。辉吮磉_(dá)中圈分類號：Q785，$565．103文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1007—9084(2014)03—0329—05Cloningandprokaryoticexpressionoffull—-lengthcDNAofRubiscosmallsubunitgene(rbcS)inGlyinemaxCUIXi—yan，DONGYa—zhi，LIUXiao—qing，ZHANGZhi—an(1．SchoolofLifeSciences，JilinA
4、griculturalUniversity，Changchun130118，China；2．CollegeofAgronomy，JilinAgriculturalUnivenity，Changchun130118，China)Abstract：ThespecificprimersweredesignedforrbcSgenebasedonthepubhshedsequence(AF303939—1)inNCBI．TotalRNAwasisolatedusingTrizolmethodfromth
5、eseedlingleavesofsoybeanvarietyJinong13andthefulllengthcDNAofrbcSwasamplifiedbymeansofreversetranscription—polymerasechainreaction(RT—PCR)．TheamplifiedfragmentwasligatedtotheprokaryoticexpressionvectorpET一30a(+)andtransformedintoE．coliBL21competentce
6、lls．Thepositivecloneswereidentifiedbydoubleenzymedigestion．Thesequencingresultsindi-catedthatthecompletecDNAsequenceofrbcSgenewas696bpwitha537bpORF(openreadingframe)anden—coded178aminoacids．A29．1kDafusionproteinwasexpressedforrbcSbyIPTGinductionthrou
7、ghSDS—PAGEanalysis．Thesizeofexpressionproductmatchedwithanticipatedtheoreticalvalue．Theproteinexpressionquantitywasmaximum(64．15％)at7hourinduction．Keywords：Glycinemax；rbcS；Genecloning；Prokaryoticexpression1，5一二磷酸核酮糖羧加氧酶(Rubisco，E．列比較穩(wěn)定，rbcL序列多用于植物的系統(tǒng)
8、發(fā)育研c．4．1．1．39)存在于所有高等植物中，是光合作用究，來確定生物種屬間差異_3l4；rbcS由細(xì)胞核基因的關(guān)鍵酶，含量約占可溶性總蛋白的50％。編碼，具有調(diào)控Rubisco活性的功能J。為了提高Rubisco由8個大亞基(rbcL)和8個小亞基(rbcS)植物固定CO的能力和光合效率，人們在Rubisco大組成。在Rubisco全酶中，rbcL主要起催化作用。小亞基結(jié)構(gòu)、功能等方面進(jìn)行了大量的研究，目前已rbcL由葉綠體基因組編碼，葉綠體基因組的堿基序有多種生物的rbcL、rbcS結(jié)構(gòu)
