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1、第51卷第1期湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)V0】．51No．12012年1月HubeiAgriculturalSciencesJan．，2012豌豆基因組SSR標(biāo)記在蠶豆中的通用性分析侯萬(wàn)偉，劉玉皎(青海省農(nóng)林科學(xué)院，西寧810016)摘要：分析了21對(duì)豌豆(Pisumsativum)~Lt,．因組SSR引物在10個(gè)蠶豆(Vicia0)品種中的通用性。結(jié)果表明，豌豆基因組SSR引物在蠶豆中的通用性達(dá)38．10％，有效引物在蠶豆品種中的多態(tài)性比例為100％。關(guān)鍵詞：豌豆(Pisumsativum)；蠶豆(Viciafa6a)；SSR；通用性中圖分類號(hào)：$643文獻(xiàn)
2、標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：0439—8114(2012)01—0185—03TransferabilityofPeaSSRMarkersinHorsebeanHOUWan-wei，LIUYu-jiao(QinghaiAcademyofAgriculture＆Forestry，Xining810016，China)Abstract：Transferabilityof21pairsofSSRmarkersofpea(Pisumsativum)inhorsebean(Vieia口)wastested．Resultsshowedthatthetransfera
3、bilityrateofpeaSSRinhorsebeanwas38．10％，andpolymorphismrateofeffectiveSSRinhorse—beanwas100％．Keywords：pea(Pisumsativum)；horsebean(Viciafaba)；SSR；transferability簡(jiǎn)單序列重復(fù)(Simplesequencerepeats，SSR)，1材料與方法是一類由1～6個(gè)堿基組成的基序(motif)串聯(lián)重復(fù)而成的DNA序列。它在真核生物的基因組中廣泛1．1試驗(yàn)材料存在，其基序兩端的序列多是相對(duì)保守的單拷貝序
4、供試蠶豆品種為：青海9號(hào)、青海1l號(hào)、青海列l(wèi)1]。與其他分子標(biāo)記相比，SSR標(biāo)記具有數(shù)量豐12號(hào)、馬牙、陵西一寸、法D、透心綠、雙“0”、湟飼、富、等位基因變異多、共顯性遺傳、重復(fù)性強(qiáng)和對(duì)基130。使用ZONG等_l7報(bào)道的2l對(duì)豌豆SSR引物因組有很好的覆蓋性等特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于基因(表1)．由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合定位、品種鑒定、圖譜構(gòu)建、種子純度檢測(cè)及遺傳多成。樣性分析等[2-6]。SSR引物的獲得可以通過(guò)3條途徑：1．2DNA提取與SSR分析一是在公共的序列數(shù)據(jù)庫(kù)(GenBank)里尋找微衛(wèi)星1．2．1蠶豆基因組DNA提取
5、取蠶豆幼嫩葉片約序列：二是基因組文庫(kù)的篩選；三是從近緣物種中1g，加液氮研磨至粉末狀，加入裝有0．8mLDNA提獲得已設(shè)計(jì)好的引物對(duì)l7]。為了降低SSR引物的開(kāi)取緩沖液[100mmol／LTris(pH8．0)+150mmol／L發(fā)成本，近年來(lái)很多學(xué)者對(duì)SSR引物在不同種、屬EDTA(pH8．O)+2．1mol／LNaCl+2％CTAB+2％PVP]物種間的通用性進(jìn)行了深入研究[8-161。本研究對(duì)21的1．5mL離心管中，65℃水浴45min后加入等體對(duì)豌豆(P／su，nsativum)基因組SSR引物在蠶豆中積氯仿／異戊醇(體積比為24：1
6、)混勻，12000r／min的通用性和多態(tài)性進(jìn)行初步研究，以快速找出可用離心10min，將上清液轉(zhuǎn)入另一離心管中，加入等于蠶豆(Viciafaba)遺傳多樣性分析、分子標(biāo)記輔助體積無(wú)水乙醇。冰上靜置20min，10000r／min離心育種等研究的分子標(biāo)記。5min，棄上清，用75％乙醇清洗沉淀3次，風(fēng)干后加收稿時(shí)間：2011-05～13基金項(xiàng)目：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(CARS一09)；青海高原作物種質(zhì)資源創(chuàng)新與利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基金：青海省高?！?35高層次人才培養(yǎng)工程”專項(xiàng)作者簡(jiǎn)介：侯萬(wàn)偉(1982_)，男，青海湟源人，助理研究員，
7、碩士，主要從事作物遺傳育種研究，(電話)1373468568O(電子信箱)h0uWanwei333@163．corn；通訊作者，劉玉皎，研究員，主要從事蠶豆遺傳育種研究，(電子信箱)lyujiao2000@yahoo．com．ca。186湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)2012正PBl4F25GAGTGAGCTrrI．I’AGCTrGCAGCCTPBl4LG—VIIPB14R22TGCTTGAGAACAGTGACTCGCAPSAA18F22CTGTAGACCAAGCCCAAAAGATPSAA18LG—II．LG—VPSAA18R22TGAGACACT兀TGACAAG
8、GAGGPSAA175F22TrGAAGGAACACAATCAGCGACPSAA175LG—III．U：一VPSAA175R22TGCG
