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《響應(yīng)面分析法優(yōu)化豆粕固態(tài)發(fā)酵工藝生產(chǎn)大豆抗氧化肽的研究-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、中國生物工程雜志ChinaBiotechnology，2012，32(12)：59-65響應(yīng)面分析法優(yōu)化豆粕固態(tài)發(fā)酵工藝生產(chǎn)大豆抗氧化肽的研究陳潔梅徐聰聰常磊劉永萍繆冰旋(暨南大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院生物工程學(xué)系廣州510632)摘要分別以總抗氧化活性(T—AOC)和多肽含量為評價指標(biāo)，通過單因素實驗分析和Box-Behnken響應(yīng)面分析法對豆粕固態(tài)發(fā)酵工藝條件進行優(yōu)化，得到最佳發(fā)酵工藝條件為：接種量9．6％，料水比1：0．9，發(fā)酵溫度35℃。豆粕在此條件下發(fā)酵48h，其總抗氧化活性與多肽含量分別由發(fā)酵前的
2、207．2U／g和21．0mg／g提高到1091．1U／g和347．7mg／g，分別提高了4．3倍和15．6倍，與預(yù)測值相比，結(jié)果吻合性良好。總抗氧化活性與多肽含量的相關(guān)性良好(R=0．8604)，表明得到的多肽為抗氧化肽。關(guān)鍵詞抗氧化肽響應(yīng)面分析法總抗氧化活性固態(tài)發(fā)酵中圖分類號TQ920．1豆粕(SBM)是大豆提油后的副產(chǎn)品，其蛋白含量產(chǎn)周期，降低生產(chǎn)成本，提高豆粕利用率，為大豆多肽高，必需氨基酸分布合理，是一種優(yōu)質(zhì)的植物性蛋白資的生產(chǎn)開發(fā)提供參考。源J。為了提高豆粕附加值，利用豆粕來生產(chǎn)大豆抗1材料
3、與方法氧化肽的研究已經(jīng)開始引起人們的注意。大豆抗氧化肽(soybeanantioxidativepeptide)即大1．1材料與培養(yǎng)基豆蛋白酶解產(chǎn)物，是由一些小分子肽段組成的具有抗豆粕：經(jīng)粉碎機粉碎，由肇慶市益信農(nóng)業(yè)發(fā)展有限氧化活性的大豆低聚肽，具有抗疲勞，延緩機體衰公司提供；老，調(diào)節(jié)機體免疫以及降低膽固醇等生理功能，是營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基：牛肉膏3g／L、蛋白胨10L、一種重要的功能性多肽。目前國內(nèi)外大多采用商品酶NaC15g／L、瓊脂粉20g／L、pH值(7．4±0．2)。水解大豆蛋白的方法生產(chǎn)大豆抗
4、氧化肽，此方法反應(yīng)液體種子培養(yǎng)基：牛肉膏3g／L、蛋白胨10g／L、NaC1條件溫和、操作簡單，但是由于商品酶制劑成本高昂、5g／L、pH值(7．34-0．2)。生產(chǎn)過程中易產(chǎn)生苦味、臭味等原因，從而限制了它的發(fā)酵培養(yǎng)基：將50g豆粕裝入250ml錐形瓶中，加廣泛應(yīng)用。而微生物固態(tài)發(fā)酵的方法不但可以克適量的水混勻，121℃條件下滅菌20min。料水比根據(jù)服酶解法產(chǎn)品的苦味、臭味等口感差的缺點，而且生產(chǎn)具體實驗設(shè)計而定。成本較低，易于規(guī)?；a(chǎn)，具有重要的理論價值和應(yīng)菌種：芽孢桿菌JM3為暨南大學(xué)生物工程
5、學(xué)系微用價值，前景廣闊“。生物實驗室保存菌種。本研究以豆粕為原料，以芽孢桿菌JM3為菌種，在1．2方法豆粕固態(tài)發(fā)酵單因素實驗分析的基礎(chǔ)上，選擇料水比、1．2．1豆粕固態(tài)發(fā)酵單因素實驗在250ml錐形瓶中接種量和發(fā)酵溫度為自變量，以總抗氧化活性和多肽加入50g豆粕，根據(jù)實驗設(shè)計加人一定比例的自來水混含量為響應(yīng)值，采用Box—Behnken響應(yīng)面分析的方法優(yōu)合均勻，在121℃條件下滅菌20min。冷卻后接種菌液化豆粕固態(tài)發(fā)酵工藝，從而獲得最佳發(fā)酵條件，縮短生分別對接種量、料水比和初始發(fā)酵溫度進行單因素發(fā)酵實
6、驗。發(fā)酵過程中每隔lOh振搖培養(yǎng)基一次，以使收稿日期：2012-09-24修回日期：2012—10-08電子信箱：54675565@qq．12ore豆粕和菌體充分混勻，發(fā)酵時間為48h。發(fā)酵結(jié)束后取60中國生物工程雜志ChinaBiotechnologyVo1．32No．12201225O適量樣品60~C烘干并粉碎，測定總抗氧化活性和多肽含量。2o001．2．2總抗氧化活性的測定口根據(jù)NY／T1205．齋盎1502006中的方法提取豆粕水溶性蛋白，測定水溶性蛋白導(dǎo)100曼的總抗氧化活性。測定試劑盒購白南
7、京建成生物工程要曲l缸研究所，每個樣品測定3次。50囂1．2．3多肽含量的測定多肽含量以酸溶性蛋白含0l：O．5l：U．6l：O．7l：08l：U．9l：l量計，取lOml水溶性蛋白提取液加入10ml15％的三氯料水比乙酸(TCA)溶液，振蕩片刻后靜置10min，4000r／min圖2料水比對豆粕固態(tài)發(fā)酵總抗氧化離心5rain，上清液即為酸溶性蛋白提取液。酸溶性蛋活性和多肽含量的影響白含量的測定采用凱氏定氮法，參照GB／T5009．5．2003oFjg·2Effectofratioofmaterialt
8、oWateronT．A0Candpolypeptidecontentofsoybeanmeal1．2．4Box—Behnken響應(yīng)面分析法通過豆粕固態(tài)bysolid-statefermentation發(fā)酵單因素實驗所確立的因素水平表，以總抗氧化活性和多肽含量為響應(yīng)值，建立多元二次回歸方程。利用Design．Expert．8．0軟件對回歸方程進行模型回歸和方差分析，確啪定豆姍粕伽固態(tài)發(fā)瑚酵最佳0工藝條件。金恙翼12結(jié)果與分析蓋曼妲刪2．1接種
