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《鱖魚肌球蛋白重鏈基因的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、2012年12月湖南師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào)Vo1．35No．6第35卷第6期JournalofNaturalScienceofHunanNormalUniversityDec．，2012鱖魚肌球蛋白重鏈基因的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備劉希良，王開卓，成嘉，蒙濤，陳敦學(xué)，李玉瓏，張紅芳。，張建社，褚武英(1．長沙大學(xué)生物工程與環(huán)境科學(xué)系，中國長沙410003；2．廣西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，中國桂林541004；3．九江學(xué)院生命科學(xué)系，中國九江332005)摘要肌球蛋白重鏈(MyHC)是肌肉中的主要結(jié)構(gòu)和功能蛋白，在肌肉收縮過程中起關(guān)鍵作用．根據(jù)鱖魚肌球蛋白重鏈基因
2、中高親水性區(qū)域DNA設(shè)計(jì)一對特異性引物，將該基因片段亞克隆到pET一32a質(zhì)粒，構(gòu)建重組表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化人大腸桿菌BL21中．誘導(dǎo)條件優(yōu)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，該菌株經(jīng)0．8mmol／LIPTG誘導(dǎo)3h可大量表達(dá)融合蛋白．將經(jīng)親和層析純化后的融合蛋白免疫新西蘭大白兔制備多克隆抗體．ELISA和免疫組化測試結(jié)果表明：此抗體有較好的特異性和抗原性．鱖魚MyHC基因表達(dá)的研究為深入研究肌球蛋白重鏈的功能特性及其對肉質(zhì)性狀的影響奠定基礎(chǔ)，為提高魚類肉質(zhì)提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持．關(guān)鍵詞鱖魚；肌球蛋白重鏈；原核表達(dá)；多克隆抗體中圖分類號Q785文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號1000—2537(
3、2012)06-0067-07ProkaryoticExpressionandPreparationofPolyclonalAntibodyofMyosinHeavyChainGenesinSinipercaChuatsiLIUXi—liang，WANGKai．zhuo，CHENGJia，MENGTao，CHENDun—XU．e，Yu．1ong，ZHANGHong-fang，ZHANGJian．she，CHUWu—ying(1．DepartmentofBiotechnologyandEnvironmentalScience，ChangshaUniversity
4、，Changsha410003，China；2．CollegeofLifeScience，GuangxiNormalUniversity，Guilin541004，China；3．CoUegeofLifeScience，JiujiangUniversity，Jiujiang332005，China)AbstractMyosinheavychain(MyHC)isoneofthemajorstructuralandcontractingproteinsofmuscle．Inthisstudy，theMyHCfragmentofSinipercachuatsiwa
5、ssubclonedintoplasmidpET-32atoconstructaHis—taggedrecombinantplasmidpET-MyHC．ThevectorwastransformedintoE．coliBI21toexpresstheHis—MyHCfusionproteininthebacteriaunderinductionofIPTG．1'hefusionproteinofabout40000wasexpressedandconfirmedbySDS—PAGEandWesternblot．TheconcentrationoftheIPT
6、Gandthelengthofinducingtimethataffectedthepro一、teinexpressionlevelwereoptimized．Itwasfoundthattheproteincanbeexpressedathi．ghlevelafterbeingin—ducedby0．8mmol／LIPTGfor3h．Afterpurificationbyone—stepaffinitychromatography，thefusionproteinwasinjectedintoNewZealandrabbitstopreparepolyclo
7、nalantibody．ThentheantibodywastestedbyELISA，andtheresultsshowedthattheantibodyhadfinespecificity．ThisworkontheMyHCgenefromtheSinipercachuatsiaddedusefulinformationforfishmolecularbiologyandfishgenomics．KeywordsSinipercachuatsi；MyHC；prokaryoticexpression；polyclonalantibody肌球蛋白是肌肉主要構(gòu)成
8、蛋白質(zhì)之一．它由Kuhne于1859年
