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《陽春砂實時熒光定量PCR內(nèi)參基因的篩選-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報2014年9月第31卷第5期814JournalofGuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicineSeptember2014，Vo1．31，No．5．南藥園地．陽春砂實時熒光定量PCR內(nèi)參基因的篩選于安民1,2，王煥1,2，何雪瑩1,2，鄧可1,2，詹若挺1,2，楊錦芬1,2(1．廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源科學(xué)與工程研究中心，廣東廣州510006；2．嶺南中藥資源教育部重點實驗室(廣州中醫(yī)藥大學(xué))，廣東廣州510006)摘要：【目的】篩選穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參基因，用于陽春砂不同發(fā)育時期的果皮和種子團(tuán)中
2、基因表達(dá)量實時熒光定量PCR(qRT—PCR)檢測的校正?！痉椒ā恳躁柎荷?個不同發(fā)育時期的果實(分為果皮和種子團(tuán))為材料，根據(jù)高通量測序得到的轉(zhuǎn)錄組和表達(dá)譜數(shù)據(jù)．選擇5個表達(dá)穩(wěn)定的常用內(nèi)參基因／3一actin、肼J、GAPDH、PGK和TUA作為候選基因，并利用qPCR技術(shù)檢測它們在不同樣品中表達(dá)水平的變化，使用GeNorm和NormFinder軟件對基因的穩(wěn)定性進(jìn)行分析?！窘Y(jié)果】5個內(nèi)參基因在不同發(fā)育時期的果皮和種子團(tuán)中的表達(dá)穩(wěn)定性有明顯的差異，其中GeNonn分析得到的內(nèi)參基因的穩(wěn)定順序為：EJ=TUA>PGK>GAPDH>fl—actin，Norm
3、Finder的分析結(jié)果中穩(wěn)定性最好的是倒1_Jd，其次為TUA，其他3個內(nèi)參基因穩(wěn)定性的排列順序與GeNoriB軟件的結(jié)果一致【結(jié)論】可選用EJd和TUA作為陽春砂果實發(fā)育過程中基因表達(dá)量差異分析的雙內(nèi)參基因。關(guān)鍵詞：陽春砂；熒光定量PCR；內(nèi)參基因；基因表達(dá)；果實中圖分類號：R284．1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：1007—3213(2014)05—0814—06DoI：10．13359~．cnki．gzxbtcm．2014．05．029陽春砂(Amomumvillo．sumLour．)是中藥砂仁cGMP一依賴性蛋白激酶I(cGMP—dependentpro
4、tein的主要來源植物．以干燥成熟果實入藥．具有化濕kinaseI，PGK)、僅一微管蛋白(一tubulin，TUA)、開胃、溫脾止瀉、理氣安胎之功效[1j。隨著分子生轉(zhuǎn)錄延伸因子一1僅ftranscriptionelongationfactor—物學(xué)技術(shù)的發(fā)展．通過實時熒光定量PCRfreal—l儀。肼1_J)5個內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性，為陽春timefluorescencequantitativePCR．qRT—PCR)技術(shù)砂基因表達(dá)量分析中內(nèi)參基因的選擇提供依據(jù)．現(xiàn)分析基因表達(dá)量的方法已被廣泛應(yīng)用目前．對陽報道如下春砂萜類生物合成途徑中功能基因的研究已
5、較為深人．已克隆獲得了陽春砂的3一羥基一3一甲基戊二酰1材料與方法輔酶A還原酶(3一hydroxy'3一methylglutaryl—CoA1．1材料陽春砂果實采自廣東省陽春市春灣堰reductase，HMGR)．1一去氧一D一木酮糖一5～磷酸還垌春砂仁生產(chǎn)基地．由廣州中醫(yī)藥大學(xué)詹若挺研究原異構(gòu)酶(1一deoxy—D—xylulose一5一phosphate員鑒定為A．rilloumLour．的新鮮果實分別采集reductoisomerase．DXR)和1一去氧一D一木酮糖一5一幼果期果實(30DAF，DAF指開花后的天數(shù))、成磷酸合成酶(1一deoxy—
6、D—xylulose一5一phosphate熟中期果實(60DAF)、成熟末期果實(90DAF)，synthase．DXS)等[2-3]關(guān)鍵酶基因．但在qPCR實驗果實采下經(jīng)簡單清潔后用液氮冷凍．包埋于干冰中中．為了盡可能排除樣本上的差異而測得準(zhǔn)確的基運輸．貯存于一80％因表達(dá)量．需要選擇穩(wěn)定的內(nèi)參基因進(jìn)行數(shù)據(jù)的校1．2試劑與儀器植物總RNA提取試劑盒(北正[41。京奧萊博生物技術(shù)有限公司)：RN38一EASYspin本研究以陽春砂3個不同發(fā)育時期的果實(分Plus植物RNA快速提取試劑盒f北京艾德萊生物為果皮和種子團(tuán))為材料，采用qPCR技術(shù)分析B一科技
7、有限公司)；PrimeScriptRTreagentkitwith肌動蛋白(一actin)、甘油醛一3一磷酸脫氫酶gDNAEraser試劑盒、PrimeSTARMaxDNA(glyceraldehyde一3一phosphatedehydrogenase，GAPDH)、Polymerase、PremixExTaq(大連寶生物工程有限收稿日期：2014—04—11作者簡介：于安民(1987一)，女，碩士研究生；E-mail：764887373@qq．con通訊作者：楊錦芬(1978一)，女，研究員；E-mail：yangjf@gzucm．edu．en基金項目：
8、國家自然科學(xué)基金資助項目(編號：81303163)第5期于安民．等
