通過rna測序技術(shù)確定肺鱗癌實時熒光定量pcr內(nèi)參基因

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1、復(fù)旦大學萬方數(shù)據(jù)碩士學位論文通過RNA測序技術(shù)確定肺鱗癌實時熒光定量PCR內(nèi)參基因IdentificationofReferenceGenesforqRT-PCRinHumanLungSquarrous-cellCarcinormbyRNA-Seq院專姓系:中山醫(yī)院業(yè):外科學名:馬軍指導(dǎo)教師:王群主任醫(yī)師指導(dǎo)小組:蔣偉、時雨、張永星、詹成完成日期:2014年4月15日萬方數(shù)據(jù)論文獨創(chuàng)性聲明本論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。論文中除了特別加以標注和致謝的地方外,不包含其他人或其它機構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過

2、的研究成果。其他同志對本研究的啟發(fā)和所做的貢獻均已在論文中作了明確的聲明并表示了謝意。作者簽名:鬲蚤日期:蟄辟,寫:S論文使用授權(quán)聲明本人完全了解復(fù)旦大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定,即:學校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件,允許論文被查閱和借閱;學??梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容,可以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存論文。保密的論文在解密后遵守此規(guī)定。作者簽名:豸釜導(dǎo)師簽名:日期.厶醍g:羅萬方數(shù)據(jù)lIllllIIIIIIIIIIIIIIIllIIIIIIllllllIIIIlUlY2867561目錄通過RNA測序技術(shù)確定肺鱗癌

3、實時熒光定量PCR內(nèi)參基因??.1中文摘要.....???.???........?...........1英文摘要....??.????...??..........?.2前言......?.......?....??...........???.3日lJ舌......?.......?....??...........???.J第一部分通過RNA測序確定肺鱗癌的內(nèi)參基因??????..5摘要..?......?????????..??.5材料與方法...??..??..............???.5結(jié)果?????

4、...??...?..??..??14討論.......?...?.?.????????.24第二部分通過qRT-PCR驗證RNA測序結(jié)果?...?..?...26摘要??....?????...?.??.??.26材料與方法....?.....??..????.??.27結(jié)果??????...???...??.??35多口木??????···???···??·??uu討論?...???????.??????37全文總結(jié)............??..??............?....38參考文獻.....?..??

5、?.?......................39綜述?.......????...........?..???..43參考文獻??...........?.......??.?....?.47附錄.................?....??????.......50致謝?.........................?..................51萬方數(shù)據(jù)通過RNA測序技術(shù)確定肺鱗癌實時熒光定量PCR內(nèi)參基因中文摘要通過RNA測序技術(shù)確定肺鱗癌實時熒光定量PCR內(nèi)參基因(中文摘要)目的:qRT-P

6、CR檢測的準確性高度依賴于可靠的內(nèi)參基因,然而在肺鱗癌細胞中許多常用的內(nèi)參基因表達并不穩(wěn)定,因此不適合于量化和標準化qRT-PCR數(shù)據(jù)。本研究的目的是在肺鱗癌中確定新的可靠的內(nèi)參基因。材料和方法:采用RNA測序技術(shù),檢測5例正常組織和44例肺鱗癌組織全基因組表達情況。檢測了15個常用的內(nèi)參基因的表達情況,以及確定了五個候選內(nèi)參基因。為了驗證RNA測序結(jié)果,我們用qRT-PCR檢測另外100對正常肺組織和肺鱗癌組織中這20例基因的表達情況,然后用geNorm和NormFinder分析結(jié)果。結(jié)果:在15例常用的內(nèi)參基因中有1

7、4例(B2M,GAPDH,GUSB,HMBS,HPRTl,IP08,PGK1,POLR2A,PPIARPLP0,TBP,TFRC,UBC,VWHAZ)表達水平太低,以致不能容易地檢測到,或表達水平在正常組織與腫瘤組織之間存在較大差異,甚至相同組織類型也存在較大的表達差異。與此相反,15例常用內(nèi)參基因中有1例內(nèi)參基因(ACTB)和5候選內(nèi)參基因(EEFlAl,F(xiàn)AU,RPS9,RPSll和RPSl4)在所有樣品中穩(wěn)定的高表達。結(jié)論:ACTB,EEFlAl,F(xiàn)AU,RPS9,RPSll和RPSl4是肺鱗癌qRT-PCR理想的

8、內(nèi)參基因,而另外14種常用的qRT-PCR內(nèi)參基因可能并不適宜。關(guān)鍵字:內(nèi)參基因肺鱗癌RNA測序萬方數(shù)據(jù)通過RNA測序技術(shù)確定肺鱗癌實時熒光定量PCR內(nèi)參基因英文摘要IdentificationofReferenceGenesforqRT-PCRinHumanLungSquamous—cellCarcinomabyR

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