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《【畢業(yè)設計-醫(yī)學論文】關(guān)于瘦素及其受體在椎間盤組織的表達及意義.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、關(guān)于瘦素及其受體在椎間盤組織的表達及意義【摘要】目的探討瘦索及其受體在椎間盤組織表達及意義。方法采用免疫組織化學技術(shù)檢測正常椎間盤（21個）與退變椎間盤（39個）組織屮瘦索及其受體的表達，用免疫細胞化學技術(shù)檢測體外培養(yǎng)的纖維環(huán)細胞屮瘦索及其受體的表達。結(jié)果退變椎問盤組織屮瘦索及其受體的表達高于正常椎間盤組織，差異有顯著性（"3.223、5.553,P【關(guān)鍵詞】瘦索;椎間盤;免疫組織化學[ABSTRACT]ObjectiveTostudytheexpressionsandtheirsignificanceofleptinandleptinreceptorinintervertebraldisc.
2、MethodsExpressionsofleptinanditsreceptorproteinweredetectedin21normalintervertcbraldiscsand39degenegativediscs,andinhumancellsofarmularfibrosusculturedinvitro,immunohistochemicallyandimmunocytochemically,respectively.ResultsTheexpressionsofleptinanditsreceptorindegenerativediscswerestrongerthanthato
3、fthenormaldiscs（t=3.223,5.553;P[KEYWORDS]leptin;intervertcbraldisc;immunohistochcmistry瘦索是肥胖基因編碼的肽類激索，體內(nèi)許多組織屮有瘦索及其受體的表達。瘦索具有很多重要的生理作用，包括調(diào)節(jié)食欲、控制體質(zhì)量、調(diào)節(jié)機體炎性反應和免疫功能及促細胞增殖等[1]。瘦索在肥胖的發(fā)生過程屮扮演重要的角色。同時，研究證明肥胖也是椎問盤蛻變的重要危險因索。椎間盤退變與骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病過稈極為相似，其機制除了傳統(tǒng)的生物力學因索外，目前研究較多的生物化學因索可能也起著比較重要的作用?，F(xiàn)已證明關(guān)節(jié)軟骨細胞可以表達瘦索及其受體，并且瘦
4、索可以刺激軟骨細胞的體外增殖，通過促進骨贅形成參與骨性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病過稈[2],而瘦索在椎間盤退變過稈屮的作用報道很少。木實驗旨在探討瘦索系統(tǒng)在椎間盤屮的表達及其在椎間盤退變發(fā)生發(fā)展屮的作用。1材料與方法1.1標本及其來源腰椎間盤標木60個，L3,4椎間盤6個，L4,5椎問盤31個，L5S1樵間盤23個。均來白于青島大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院2008年4月-2009年1刀因腰椎間盤突出癥、腰椎外傷爆裂骨折經(jīng)手術(shù)治療的病人。所有病人均知情同意。病人中男27例,女24例;年齡21?59歲,平均41歲。所有病人術(shù)前均未行過硬膜外封閉、化學溶核及經(jīng)皮穿刺髓核切吸術(shù)。所取標木包括纖維環(huán)和髓核。正常組21個，納入標
5、準為：①術(shù)前MRI顯示所取的椎間盤組織T2加權(quán)像上Pfirrmarm分級I?III級;②術(shù)前無神經(jīng)根刺激癥狀。退變組39個，納入標準為：①術(shù)前MRI顯示所取的椎間盤組織T2加權(quán)像Pfirrmann分級IV?V級;②術(shù)前存在明顯神經(jīng)根刺激癥狀。齊標木取出后置于40g/L甲醛溶液屮固定，Carnoy液4°C過夜，不同梯度的乙醉脫水，二甲苯透明，石蠟包埋。4?5Um厚連續(xù)切片，以備蘇木精伊紅染色和免疫組化檢測用。1.2方法1.2.1切片光鏡觀察用蘇木精伊紅常規(guī)染色。1.2.2免疫組織化學染色瘦索兔抗人多克隆抗體和瘦索受體羊抗人多克隆抗體購HSantaCruze公司；ImmunostainSPKit試
6、劑盒和DAB顯色試劑盒購自福州邊新生物技術(shù)開發(fā)公司。載玻片均經(jīng)多聚賴氨酸浸泡24h防脫片處理，60°C烤箱烘烤干燥。切片常規(guī)講行脫蠟、阻斷內(nèi)源性過氧化酶的活性、抗原修復和封閉，采用SP法進行免疫組織化學染色，DAB顯色。實驗中采用PBS代替一抗作為陰性對照，以脂肪組織的染色結(jié)果作為陽性對照。結(jié)果判定：瘦索及其受體表達陽性物質(zhì)位于細胞內(nèi)，陽性結(jié)果為棕黃色。每張切片隨機選取纖維環(huán)區(qū)域10個高倍鏡視野，計數(shù)每個視野的陽性細胞數(shù)，再將10個高倍鏡視野細胞數(shù)相加，得出每個樣木陽性纖維壞細胞數(shù)。1.2.3纖維環(huán)細胞培養(yǎng)椎間盤標本取自25歲男性腰椎間盤突出癥病人，在離體30min內(nèi)取冋實驗室。仔細分離出纖維
7、環(huán)組織，把纖維環(huán)紐?織剪成lmm大小的碎塊，用胰蛋白酶及膠原酶消化后，細胞用IIAMF12培養(yǎng)液沖洗3次，低速離心5min,計數(shù)板進行細胞計數(shù)。將細胞接種于培養(yǎng)瓶內(nèi)，置于培養(yǎng)箱屮進行培養(yǎng)。細胞爬片行蘇木精伊紅染色，見細胞為梭形或多角形，胞核卵圜形，胞漿淡染。然麻進行瘦素檢測：40g/L多聚甲醛固定10min;PBS沖洗3次,每次3?5min;2g/LTritonX100透化,室溫5min;PBS沖
