嗜酸乳桿菌表面疏水性對其亞油酸異構(gòu)酶酶活的影響-論文.pdf

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1、第29卷第2期安徽工程大學(xué)學(xué)報Vo1．29．No．22014年6月JournalofAnhuiPolytechnicUniversityJun．，2014文章編號：16722—477(2014)02—0005—04嗜酸乳桿菌表面疏水性對其亞油酸異構(gòu)酶酶活的影響丁錫龍，魏明，薛正蓮，趙世光(安徽工程大學(xué)生物與化學(xué)工程學(xué)院，安徽蕪湖241000)摘要：研究碳源、氮源、生長時間以及生長溫度對嗜酸乳桿菌細(xì)胞表面疏水性及其亞油酸異構(gòu)酶酶活力的影響．通過Minitab15軟件進(jìn)行嗜酸乳桿菌亞油酸異構(gòu)酶酶活力對

2、其表面疏水性的回歸分析，結(jié)果表明，嗜酸乳桿菌菌體表面疏水性與其亞油酸異構(gòu)酶酶活成正相關(guān)關(guān)系，回歸方程為：y一1．5500x+78．163．R一0．7507說明模型有較高的擬合度，顯著性分析P(0．003)

3、高骨骼密度及防治糖尿病等多種重要生理功能，對于高血壓、心臟病、糖尿病和癌癥的防治有著重要意義[1q]．乳酸桿菌含有亞油酸異構(gòu)酶[4]，能把亞油酸催化成共軛亞油酸Is]，一般采用酶提取法，即通過物理的方法破碎菌體從而得到亞油酸異構(gòu)酶，但是這樣影響酶的天然活性及催化效率．利用全細(xì)胞轉(zhuǎn)化亞油酸能保持酶的天然活性，但是細(xì)胞膜成為底物亞油酸和產(chǎn)物進(jìn)出細(xì)胞的障礙，為生物轉(zhuǎn)化造成困難．本研究以嗜酸乳桿菌為研究對象，通過其表面疏水率來確定影響嗜酸乳桿菌表面疏水性的因素，并探討嗜酸乳桿菌表面疏水性與其亞油酸異構(gòu)酶酶

4、活之間的關(guān)系，為進(jìn)一步提高全細(xì)胞催化亞油酸為共軛亞油酸的效率提供新的思路和理論根據(jù)．1材料與方法1．1材料與儀器(1)主要試劑與培養(yǎng)基．嗜酸乳桿菌(Lactobacillus．a(chǎn)cidophilus)由安徽工程大學(xué)實驗室209保藏，MRS培養(yǎng)基按文獻(xiàn)[6]制備：葡萄糖，蛋白胨，牛肉膏，酵母膏，七水硫酸鈉，四水硫酸錳，乙酸鈉，吐溫一80，磷酸氫二鉀，檸檬酸氫二銨，瓊脂；二甲苯，磷酸二氫鉀均為分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)有限公司．(2)主要儀器與設(shè)備．8O一2離心機(jī)(江蘇省金檀市華容儀器有限公司)，Sp-75

5、4紫外可見分光光度計(上海光譜儀器有限公司)，JK3OO—DB超聲波清洗器(合肥金尼克機(jī)械制造有限公司)，F(xiàn)C-104電子分析天平(上海佑科儀器有限公司)，GHP一9050隔水式電熱恒溫培養(yǎng)(上海一恒儀器有限公司)，SYQ-DSX-280A手提式壓力蒸汽滅菌鍋(上海申安儀器有限公司)．1．2實驗方法(1)嗜酸乳桿菌的培養(yǎng)．用100mL三角瓶裝6OmLMRS培養(yǎng)基，接入1的菌種，37℃培養(yǎng)36h．(2)菌體重懸液制備．將菌懸液以4000r／min，離心15min，收集菌體，用磷酸鹽緩沖液[7洗滌菌體

6、2次．以磷酸鹽緩沖液為空白對照，并用磷酸鹽緩沖液調(diào)整質(zhì)量濃度，使其在分光光度計600am波長下OD值為0．6±0．02．(3)菌體表面疏水率的測定．取4mL調(diào)整質(zhì)量濃度后的菌液加入200uL二甲苯，對照組不加，該兩相體系通過渦旋徹底混合60S，靜置15min分層．取水相，以磷酸鹽緩沖液為空白對照，測量A60O值．計算公式：疏水率()=(對照組A600一試驗組A6o0)／對照組A600×100．每組平行做10管，分別記錄OD收稿日期：2013—11-22基金項目：安徽省高校省級自然科學(xué)基金資助項目(

7、KJ2008B025，2OllAO37)作者簡介：丁錫龍(1988一)，男，安徽休寧人，碩士研究生．通訊作者：魏明(1969一)，男，安徽合肥人，副教授，碩導(dǎo)．·6·安徽工程大學(xué)學(xué)報第29卷值，進(jìn)行5次獨立實驗．采用微生物黏著碳?xì)浠衔锓?BacteriaAdhesionToHydrocarbons，BATH)L8]，通過試驗菌株對碳?xì)浠衔锏挠H和力反映菌株表面的疏水性，來測定嗜酸乳桿菌細(xì)胞表面疏水率．(4)亞油酸異構(gòu)酶酶活的測定．酶活單位的定義：在上述條件下，1rain生成1ug共軛亞油酸所需要

8、的酶量為1個酶活單位U，這里以U／g濕細(xì)胞表示．取10mL菌體重懸液于50mL三角瓶當(dāng)中，滴加亞油酸至0．5mg／mL，于37℃，120r／rain振蕩培養(yǎng)箱中反應(yīng)3h．然后加入正己烷2OmL萃取共軛亞油酸；離心之后取正己烷層，在233nm處用紫外分光光度計測其吸光值，對照共軛亞油酸標(biāo)準(zhǔn)曲線可求得共軛油酸含量，共軛亞油酸標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y：10．2x一0．69，R：0．998．(5)數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析．利用Minitab15軟件進(jìn)行嗜酸乳桿菌亞油酸異構(gòu)酶酶活力對其表面疏水性的回歸分析，采用的