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《反相高效液相色譜法(rp-hplc)測定丙酮酸發(fā)酵液中丙酮酸》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)第21卷第1期2006年3月天津科技大學(xué)學(xué)報(bào)Jour衄lofTianjinUniVersi夠ofScience&Tech∞logyV01．21N0．1Mar．2006反相高效液相色譜法(RP-HPLC)測定丙酮酸發(fā)酵液中丙酮酸高年發(fā)，吳迪，張健(天津市工業(yè)微生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津科技大學(xué)生物工程學(xué)院，天津300222)摘要：提出一種利用反向高效液相色譜法(RP-HPLc)測定丙酮酸發(fā)酵液中丙酮酸的方法。應(yīng)用反相c，。色譜柱0DS-2HYPERSIL250mm×4．6mm5斗m，以0．05m01．
2、L．1NH4H2P04(用H3P04調(diào)pH2．6)為流動相，發(fā)酵液經(jīng)稀硫酸預(yù)處理后直接進(jìn)樣分離定量，每一樣品的分析過程不超過5min，可及時了解丙酮酸發(fā)酵過程中丙酮酸的變化，適于發(fā)酵液中丙酮酸的檢測。關(guān)鍵詞：反向高效液相色譜法；丙酮酸發(fā)酵液；丙酮酸中圖分類號：TQ921．7文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1672_6510{2006)01m021JD4Deterlni的tionofPymVateinPy川VateFe珊entationBmth協(xié)Reve瑪ed-ph嬲eHigh—perfo珊anceLiqlli
3、dChromatog咫phy(RP-HPLC)GAONi鋤-fa，WUDi，ZHANGJi鋤(TianjinKeyLaboratoryofIndustrialMicmbiology，CollegeofBiotechnology，TianjinUniVersityofScience＆Technology，Tianjin300222，China)Abst髓ct：ARP-HPLCmethodforthedetenninationofpyruvateinpyruvatefe瑚entationbrothw鵲de
4、veloped．0DS-2HY-PERSILC18columnwasusedandmobileph髂ewasO．05m彬LNH4H2P04(adjustedtopH2．6witllH3P04)．碼e801u—tion0fs砌plespre—treated硒tht11esolutionofs幽ricacidwauldbed反emined，nea11alysispmcesswouldbe矗nishedinfiveminutes．Themethodwaspmvedarapide玨．ectivewaytode
5、te邛【linethepyruvateinpymvatefe冊emationbmth．融”惻心：reversed—ph船ehighpe艋nanceliquidchromat唧ph(RP—HPLC)；p)rnlvatefe珊entationbrotll；pyruvate丙酮酸是機(jī)體代謝的重要中間代謝產(chǎn)物，是多種氨基酸、維生素以及其他一些有用物質(zhì)合成的重要前體，在化工、制藥和農(nóng)用化學(xué)品工業(yè)中有廣泛的用途¨J。由于近年來丙酮酸所具有的獨(dú)特的減肥效果，丙酮酸的世界需求量迅速增長，價格居高不下，引起生產(chǎn)和研究的
6、熱潮舊J。丙酮酸及其他有機(jī)酸，可采用氣相色譜分離。但采用氣相色譜法進(jìn)行有機(jī)酸分析時，常因有機(jī)酸的沸點(diǎn)較高、不易氣化而需要先對其衍生再進(jìn)行測定舊J，方法繁瑣；同時又因有機(jī)反應(yīng)不易定量進(jìn)行而直接影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。早期的有機(jī)酸液相色譜測定方法，大多是采用陽離子交換法分離，然后以示差檢測器檢測。其檢測器影響因素多，靈敏度收稿日期：2005．05—13作者簡介：高年發(fā)(1945一)，男，江蘇吳江人，教授，博士生導(dǎo)師低，樣品需要富集HJ，而且離子柱與反相c，。色譜柱相比，價格昂貴，適用范圍窄。目前反相高效液相
7、色譜(RP—HPLc)是應(yīng)用最廣泛的液相色譜法，本文進(jìn)行了RP—HPLC法測定發(fā)酵液中丙酮酸含量的研究，并把用離子柱sCR-101H¨1與用反相C。8色譜柱ODsl2HY—PERSIL兩種色譜柱的測定方法的測定參數(shù)作了比較。提出一種利用反向高效液相色譜(RP-HPLC)測定丙酮酸發(fā)酵液中丙酮酸的方法，確定了最佳色譜分離條件，可對丙酮酸發(fā)酵液定性定量分析，從而指導(dǎo)菌種選育和發(fā)酵條件的研究，為以后進(jìn)行這方面的研究提供條件。萬方數(shù)據(jù)·22·1材料與方法1．1儀器與設(shè)備ssIPC2000型高壓液相色譜儀(Ss
8、IⅢ型輸液泵，500型紫外可見檢測器，ANASTAR色譜工作站)；LD5—10型低速離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)；sP-2102uV型紫外可見分光光度計(jì)(上海光譜儀器有限公司)；循環(huán)水式多用真空泵sHBⅢ(河南省鞏義市站街光亞儀器廠)；PHs．3c型精密pH計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；AS2120A．型超聲波清洗器(天津奧特賽恩思儀器有限公司)；移液槍(日本制造)。1．2主要試劑超純水；葡萄糖(色譜純)；H，PO。(生化試劑)；NH。H：PO。(分析純
