中草藥飼料添加劑對(duì)真鯛幼魚(yú)非特異性免疫的影響

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1、http://www.paper.edu.cn中草藥飼料添加劑對(duì)真鯛幼魚(yú)非特異性免疫的影響馮劍大連天正實(shí)業(yè)有限公司(116011)aluard006@sina.com.cn摘要：設(shè)計(jì)中草藥配方分別以1%、2%、3%劑量分粉劑和汁劑的方式添加到基礎(chǔ)飼料中，連續(xù)投喂真鯛幼魚(yú)（體重22.18±1.44g，體長(zhǎng)9.36±0.22cm）2個(gè)月。分三個(gè)階段（每20天一階段）測(cè)定魚(yú)體血液中的NBT陽(yáng)性細(xì)胞和血清中的溶菌酶的活力。結(jié)果表明，中草藥添加劑能夠極顯著地影響真鯛幼魚(yú)的NBT陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和血清中的溶菌酶的活力（p<0.01）。兩種添加方式均在第二、

2、三階段比對(duì)照組出現(xiàn)了極顯著的差異，且均以2%的添加方式為最佳。關(guān)鍵詞：真鯛；中草藥添加劑；溶菌酶；NBT陽(yáng)性細(xì)胞；1.引言近年來(lái)養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)得到了迅速發(fā)展，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)在世界范圍內(nèi)蓬勃發(fā)展的同時(shí)，由于高密度集約化養(yǎng)殖、過(guò)量投餌等原因，而造成環(huán)境惡化，導(dǎo)致各類(lèi)細(xì)菌[1][2]病、病毒病的頻繁發(fā)生，嚴(yán)重阻礙了水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展、魚(yú)類(lèi)、貝類(lèi)、蝦類(lèi)、蟹類(lèi)均發(fā)生過(guò)大面積死亡，尤其某些病毒性疾病的死亡率可達(dá)60%-100%，對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的[3-7]打擊是毀滅性的。在大規(guī)模和高密度人工養(yǎng)殖環(huán)境下，魚(yú)類(lèi)等養(yǎng)殖對(duì)象對(duì)病原的敏感性大大提

3、高，從而易造成傳染病的發(fā)行和流行。目前已從生理、病理、種質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)、生態(tài)、流[8]行特點(diǎn)等方面進(jìn)行了大量研究。免疫機(jī)制的研究是合理有效防治各類(lèi)病害的根本和依據(jù)。非特異性免疫抵抗機(jī)制，包括血清補(bǔ)體、溶菌酶等非特異性體液因子的活動(dòng)以及巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞的吞噬活動(dòng)等，對(duì)于魚(yú)體抵抗病原的侵襲和感染具有重要作用。所以增強(qiáng)魚(yú)類(lèi)非特[9]異性免疫能力，提高整體抗病力是發(fā)展水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的重要手段。作為中華瑰寶的中草藥資源十分豐富，盡管已有許多研究表明中草藥作為免疫增強(qiáng)劑具有優(yōu)良的應(yīng)用效果，但目前漁業(yè)生產(chǎn)上的研究應(yīng)用有限而影響了其在漁業(yè)上的推廣應(yīng)用。本試驗(yàn)旨在

4、探討不同添加方式和不同劑量的中草藥飼料添加劑對(duì)真鯛幼魚(yú)非特異免疫能力的影響，從而找到一個(gè)合理有效的添加方式和添加劑量及用藥時(shí)間。為真鯛的人工養(yǎng)殖提供理論數(shù)據(jù)。2.材料與方法2.1材料2.1.1基礎(chǔ)飼料組成基礎(chǔ)飼料的配方見(jiàn)表1，基礎(chǔ)飼料的主要營(yíng)養(yǎng)概略分析見(jiàn)表2。-1-http://www.paper.edu.cn表1基礎(chǔ)飼料主要成分含量（%）Tab1Maincompositionofthebasicdiet(%)組分contents百分含量percentage魚(yú)粉（蛋白質(zhì)含量約為70%）55豆粕26小麥粉7誘食劑(烏賊粉)5維生素混合物2粘

5、合劑（海藻酸鈉）2魚(yú)油1礦物質(zhì)混合物1三氧化二鉻0.2表2試驗(yàn)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的含量（%）Tab2Nutritioncompositionofthetestdiet試驗(yàn)飼料水分蛋白質(zhì)脂肪碳水化合物灰分testwaterproteinfatcarbohydratecrudeash對(duì)照組:C:9.0455.4110.7119.495.35處理組：F1:8.7154.8110.8620.425.20F2:9.0454.6810.6920.015.58F3:8.8154.4210.3621.434.98A1:9.7152.9811.8921.195.

6、23A2:8.5753.8510.7821.195.61A3:9.8654.5610.5619.335.692.1.2藥餌的配制將黃芪、黨參、當(dāng)歸、枸杞等十種中草藥均粉碎為粉末配比混勻，制備成復(fù)方中草藥粉式添加劑Ⅰ和汁式添加劑Ⅱ，按1%、2%、3%的比例添加到基礎(chǔ)飼料中去。制成顆粒，晾干后冰箱保存?zhèn)溆谩?.1.3試驗(yàn)魚(yú)與飼養(yǎng)管理試驗(yàn)用魚(yú)為體重22.18±1.44g，體長(zhǎng)9.36±0.22cm身體健康，無(wú)病害、寄生蟲(chóng)、規(guī)格整齊的真鯛幼魚(yú)。將其飼養(yǎng)于大連水產(chǎn)學(xué)院農(nóng)業(yè)部海水增養(yǎng)殖生態(tài)學(xué)與生物技術(shù)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室的循環(huán)式控溫水族箱中，試驗(yàn)時(shí)每個(gè)水槽

7、（80cm*40cm*50cm，實(shí)際水量120L）內(nèi)隨機(jī)放魚(yú)15尾，馴養(yǎng)一個(gè)星期，馴養(yǎng)時(shí)每天用基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，每天早晨7點(diǎn)和下午5點(diǎn)投餌，每次投餌前虹吸出糞便，投餌后半小時(shí)吸出殘餌，水溫22±0.5℃，溶氧大于5mg/ml，NH3-N小于0.5mg/L，pH為8.0±0.5。試驗(yàn)開(kāi)始后，用添加了中草藥飼料添加劑的飼料飼養(yǎng)真鯛，飼養(yǎng)跟馴化時(shí)一樣，收集殘餌和糞便并進(jìn)行紀(jì)錄。2.1.4溶菌酶試劑盒-2-http://www.paper.edu.cn購(gòu)自南京建成生物工程研究所2.1.5藥品的配制綠化硝基四氮唑藍(lán)（NBT）用無(wú)菌生理鹽水配制成2g/L

8、。2.2方法2.2.1血清的制備與血細(xì)胞的收集在真鯛的臀鰭基部用一毫升的注射器采血，一部分注入離心管中以制備血清，余血用肝素鈉抗凝，收集血細(xì)胞用以NBT陽(yáng)性細(xì)胞檢測(cè)。2.2.2NBT陽(yáng)性細(xì)胞的