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《嗜酸乳桿菌表面錨定展示H5N1亞型禽流感病毒血凝素HA1蛋白的研究.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、第36卷第8期中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)Vo1．36．NO．82014年8月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineAug．2014doi：10．3969~．issn．1008-0589．2014．08．03嗜酸乳桿菌表面錨定展示H5N1亞型禽流感病毒血凝素HA1蛋白的研究高明，崔紅玉，王笑梅，王云峰(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱150001)摘要：為研究乳酸茵載體細(xì)胞表面錨定結(jié)合展示外源蛋白，本研究將禽流感病毒(AIV)H5N1亞型血凝素HAl
2、基因克隆于pET．28a載體中，同時(shí)PCR擴(kuò)增編碼S．層蛋白的錨定區(qū)域基因Slap—C，并插入HA1基因下游構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET．HA1．Slap，轉(zhuǎn)化于E．coliBL21中進(jìn)行HA1．Slap融合蛋白的表達(dá)，SDS．PAGE檢測(cè)顯示表達(dá)的HA1．Slap主要以包涵體形式存在。融合蛋白經(jīng)鎳柱純化、透析復(fù)性，與氯化鋰處理的嗜酸乳桿茵混合孵育，SDS．PAGE和間接免疫熒光檢測(cè)表明HA1．Slap錨定結(jié)合并展示于嗜酸乳桿菌細(xì)胞壁表面，并且具有良好的穩(wěn)定性。本研究結(jié)果證明了嗜酸乳桿菌細(xì)胞壁表面展示AIV的HA1抗原蛋白的可行性
3、，為新型乳酸茵載體黏膜免疫疫苗的研究奠定基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：嗜酸乳桿菌；S．層蛋白錨定展示；HA1蛋白中圖分類(lèi)號(hào)：$852．61文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1008．0589(2014)08．0593．04Lactobacillusacidophilussurfacedisplayrecombinanthemagglutinin1ofavianinfluenzavirus(H5N1)GAOMing，CUIHong—yu，WANGXiao-mei，WANGYun-feng(StateKeyLaboratoryofVeterinaryBi
4、otechnology，HarbinVeterinaryResearchInstituteChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China)Abstract：Inthepresentstudy，theS-layerproteinsurfacedisplaysystemwasusedtotestthepossibilityofdisplayingH5N1avianinfluenzavirushemagglutininprotein1(HA1)onLactobacil
5、lusacidophilussurface．ThehemagglutininHA1wasfusedtothecellwall·bindingproteinregionoftheS-layerprotein，andtherecombinantproteinwassuccessfullyproducedinEscherichiacoli．ItwaspurifiedusingaHistagaffinitycolumnandrefold，then，mixedwithacultureofL．a(chǎn)cidophilus．SDS—PAGEan
6、dimmunofluorescenceassayshowedthebindingoftherecombinantHA1一Slapproteinonthesurfaceofthebacterialcells．ThesystemdemonstratedtheutilizationoftheL．a(chǎn)cidophilusasamucosalvaccinedeliveryvehicletosurfacedisplaytheantigenicproteinsofavianinfluenzavirus．Keywords：Lactobacil
7、lusacidophilus；S-layerproteinsurfacedisplaysystem；hemagglutininprotein1(HA1)*Correspondingauthor收稿日期：2014．02．17基金項(xiàng)目：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室自主研究課題(SKLVBP201310)作者簡(jiǎn)介：高明(1988一)，男，河北秦皇島人，碩士研究生，主要從事獸醫(yī)微生物與分子生物學(xué)研究．通信作者：E．mail：yfwang@hvri．a(chǎn)c．ca594中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)2014往嗜酸乳桿菌(La
8、ctobacillusacidophilus)是一種具物Slap．-F／R(表1)擴(kuò)增Slap—C基因片段。有益生作用的乳酸菌，是人體和動(dòng)物腸道中的重要利用蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)UniProtKB檢索H5N1亞型微生物，其對(duì)酸和膽鹽有較強(qiáng)的抵抗力，是一種理高致病性AIVA／goose／Guangdo
