升麻多糖提取及其抗氧化作用.pdf

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1、第30卷，第5期光譜實(shí)驗室Vo1．30，No．52013年9月Chinese0￡c7‘nalofSpectroscopyLaboratorySeptember，2013升麻多糖提取及其抗氧化作用①吳天彥②(安慶師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院安徽省安慶市菱湖南路128號246011)摘要研究了升麻多糖的提取及其對羥基自由基的清除作用。采用熱水浸提及醇沉法從升麻中提取多糖，通過比色法研究其清除羥基自由基的能力。升麻多糖清除能力與多糖濃度有明顯的量效關(guān)系，清除50％羥基自由基所需要的多糖濃度為2．4mg／mL，結(jié)果表明升麻多糖具有良好的清除羥基自由基的能力。關(guān)鍵詞升麻

2、；多糖；提??；羥基自由基中圖分類號；0657．32文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1004—8138(2013)05—2444—031引言升麻(CbnicifugafoetidaL．)為毛茛科升麻屬植物，該族植物是我國傳統(tǒng)中藥，早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有記載，有著悠久的用藥歷史。其藥用部位為根與根莖部分，含有多種化學(xué)成分，目前已從升麻屬植物中分離得到大約2百多個化合物，主要含有環(huán)阿爾廷烷型三萜皂苷和肉桂酸衍生物兩大類化合物引。其中，三萜皂苷是最主要的生物活性成分，具有解毒、抗炎、解熱鎮(zhèn)痛、抗病毒、降血脂等作用，臨床用于治療婦女更年期綜合癥和骨質(zhì)疏松，以及對體外乳

3、腺癌具有良好的細(xì)胞毒作用。但其多糖類成分卻少見報道，本文提取了升麻多糖，并研究其清除自由基的抗氧化活性，為進(jìn)一步開發(fā)升麻的中藥資源打下良好基礎(chǔ)。2實(shí)驗部分2．1實(shí)驗材料與儀器2．1．1材料升麻購自安慶春源大藥房，經(jīng)安慶師范學(xué)院張中信老師鑒定。2．1．2試劑95乙醇、無水乙醇、乙醚、三氯醋酸、NaOH、水楊酸、FeSO、HO均為分析純試劑。實(shí)驗用水為蒸餾水。2．1．3儀器Y500型中藥粉碎機(jī)(上海億貝特粉碎機(jī)制造廠)；HetoUltraFreeze5410型超低溫冰箱(德國HetoHolten公司)；FD一1型冷凍干燥機(jī)(北京博醫(yī)康實(shí)驗儀器有限公司)；R

4、E一52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀①安徽省教育廳自然科學(xué)重點(diǎn)研究項目(KJ2OO7A123zc)；校教研項目(040—120006000008)②聯(lián)系人：電話：(0556)550O277；E—mail：sportman821@sina．com作者簡介：吳彥(1973一)，男，安徽省安慶市人，教授．碩士，從事生物化學(xué)及植物活性成分研究。收稿日期：2013-03—30；接受日期：2013—04—09第5期吳彥：升麻多糖提取及其抗氧化作用(上海滬西分析儀器廠)；722型分光光度計(上海悅豐儀器儀表有限公司)。2．2實(shí)驗方法2．2．1升麻粗多糖的提取[5升麻干藥材用中藥粉

5、碎機(jī)粉碎，過6O目篩備用。取100g升麻粉末加蒸餾水2000mL，沸水煮開提取2h，重復(fù)3次；將3次提取液合并、濃縮，乙醚脫脂；用15三氯醋酸在4℃下脫蛋白；4000r／min離心15min，沉淀為蛋白質(zhì)，棄去不用；上清液1ONaOH中和，流水透析2天；再濃縮，乙醇沉淀；沉淀為粗多糖，收集沉淀，先在超低溫冰箱一80~C冷凍12h，然后放人冷凍干燥機(jī)冷凍干燥24h，得灰褐色粉末狀升麻粗多糖。2．2．2升麻粗多糖對羥基自由基清除試驗[6按照Smimoff(1989)的方法，利用H。0：與Fe?；旌袭a(chǎn)生·OH，在體系內(nèi)加入水楊酸捕捉·OH并產(chǎn)生有色物質(zhì)。反應(yīng)

6、體系中含8．8mmol／LH2OlmL，9mmol／LFeSOlmL，9mmol／I水楊酸一乙醇溶液lmL，不同濃度的多糖溶液lmI。最后加H。O。啟動反應(yīng)，37℃反應(yīng)0．5h，在510nm下測量吸光度。考慮到多糖本身的吸收光值，以9mmol／LFeSOlmL，9mmol／I水楊酸一乙醇溶液lmI，不同濃度的多糖溶液lmI和lmI蒸餾水作為多糖的本底吸收值。清除率計算公式為：清除率()一[(。一(x—)／。]×1000,4式中：。——空白對照液的吸光度；Ax——加入多糖溶液后的吸光度；Axo——不加顯色劑HO多糖溶液本底的吸光度。3結(jié)果與討論3．1升麻

7、粗多糖得率計算多糖得率()一(多糖干重／升麻樣品量)×100按照上式，100g升麻共制得升麻粗多糖干品1．42g，得率為1．42。3．2升麻粗多糖對羥基自由基的清除力對不同濃度升麻粗多糖溶液進(jìn)行清除羥基自由基能力測定(見圖1)，升麻多糖對·OH有明顯的清除作用。隨著多糖質(zhì)量濃度的增加，清除·OH的能力逐漸增加，多糖濃度在5mg／mL以后接近最大清除率，最大清除率超過9o。清除5O羥基自由基所需的多糖濃度為多糖濃度／rag·mL‘2．4mg／mI。圖1升麻多糖濃度對羥基自由基清除率的影響以維生素C為清除羥基自由基抗氧化性實(shí)100驗的參照品，清除5O羥基自

8、由基所需的維生素C濃度為1．3mg／mI(見圖2)。6o僻4結(jié)論籃懊羥基自由基的反應(yīng)性極強(qiáng)，壽