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1、鮑魚內臟多糖提取及其抗氧化活性探究摘要:研究分別采用了609蒸館水浸提、胃蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶水解的方法對鮑魚內臟多糖進行提取,并測定了鮑魚內臟多糖的還原力、清除軽自由基、超氧自由基能力。結果表明，胃蛋白酶對多糖的浸出率最高，達0.71%o各組多糖均具有良好的抗氧化能力。關鍵詞:鮑魚內臟;多糖;抗氧化中圖分類號：R735.7文獻標識碼:A文章編號:1674-0432(2010)-10-0170-2在鮑魚加工過程中產生了大量下腳料，如鮑魚內臟，鮑魚殼等。其中，鮑魚內臟占鮑魚體重達20-30%,含有豐富的蛋白質、氨基酸、脂肪及碳水化合物,可開發(fā)為飼料，調味料和多糖保健品等產品。
2、鮑魚內臟多糖具有抗氧化能力，并具有抗癌和增強免疫力的功能。本文運用熱水浸提法和酶解法對鮑魚內臟多糖進行提取,并對其體外抗氧化活性測定，為鮑魚內臟的開發(fā)利用打下基礎。1材料與方法1.1材料1.1.1原料與試劑鮑魚內臟，由福建省詔安東欣食品有限公司提供;中性蛋白酶(酶活力為1?3x104U/g),購于無錫酶制劑廠;胃蛋白酶（酶活力為1.0x103U/g）,木瓜蛋白酶（酶活力為1.9x104U/g）購于國藥集團化學試劑有限公司，其余藥品均為分析純。1.1.2主要儀器SP-75紫外分光光度計:上海光譜儀器有限公司;DKB-8A電熱恒溫水槽:上海精宏實驗設備有限公司:PB-10pH計;德國賽多
3、利斯科學儀器有限公司;大容量離心機:德國艾本德股份公司;scientz-12B普通型冷凍干燥機:寧波新芝生物科技有限公司。1.2方法1.2.1多糖提取鮑魚內臟，去除雜質,用絞肉機絞碎，選用熱水浸提法（609）、酶解法（胃蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶）分別對100g鮑魚內臟進行處理，條件如表1所示：經離心和過濾后，獲得浸提液，真空濃縮后，加Sevage試劑（氯仿:正丁醇=4:1）除蛋白，加入10g活性炭粉脫色。過濾除去活性炭后，用3倍體積的95%乙醇進行沉淀，冷凍干燥，即得鮑魚多糖。1.2.3理化性質分析多糖測定:苯酚硫酸法;淀粉檢測:碘■碘化鉀反應;蛋白質檢測:苗三酮反應;還原糖檢
4、測:菲林試劑法。1.2.4多糖抗氧化活性分析多糖還原力測定:鐵氧化鉀法;清除輕自由基（?OH）能力實驗:Fe2+-脫氧核糖體系法;清除超氧自由基（02--）能力實驗:鄰苯三酚自氧化法。2結果與分析2.1鮑魚內臟原料分析將鮑魚內臟的主要成分進行測定，結果如表2所示。測定結果表明，鮑魚內臟主要由蛋白質、脂肪和碳水化合物構成,其中，碳水化合物含量達5.68%o因此,對鮑魚內臟多糖的提取具有可行性。2.2不同提取方法對鮑魚內臟多糖含量的影響對提取過程中各步驟的多糖進行跟蹤測定，結果如表3所示。胃蛋白酶對鮑魚內臟多糖的浸提效果最好，浸提率達0.71%,對比熱水浸提組提高了47.9%O中性蛋白酶
5、組的多糖浸提率比熱水浸提組提高了10.4%o而堿性蛋白酶組與熱水浸提組多糖浸提率相近。多糖經脫蛋白、脫色、乙醇沉淀后其含量具有一定的損失。因此，應該根據活性多糖的性質對提取、純化方法進行改進。2.3多糖理化性質分析各組粗多糖均呈灰白色粉末，易溶于水,不溶于乙醇、丙酮、乙醞等有機溶劑;顯示反應表明，實驗所提取的粗多糖非淀粉性多糖和還原糖，可能為多糖和蛋白質的復合物。2.4多糖還原力測定多糖的還原力與其抗氧化活性具有一定的相關性。因此,對各組多糖還原力的測定可以間接進行抗氧化能力的比較。如圖1所示,四種方法提取的多糖均具有較好的還原力。隨著多糖的濃度升高多糖還原力增大，在一定范圍內表現出
6、線性關系。中性蛋白酶處理組的還原力最高，其次分別為堿性蛋白處理組、胃蛋白酶組和熱水浸提組。2.5多糖清除軽自由基能力測定生物體內軽自由基的含量與其衰老、腫瘤、輻射損傷和細胞吞噬等具有一定的相關性。因此，測定軽自由基清除率是反映多糖抗氧能力的重要指標。如圖2所示，四種方法提取的多糖清除軽自由基能力都隨著多糖濃度的增加而增加，在高濃度時清除率呈減緩趨勢。各處理在低濃度時清除率相差較大，而高濃度時差異較小。其中,堿性蛋白酶處理組的IC50為26.7mg/ml,濃度最低，而溫水浸提組的IC50為39.9mg/ml,濃度最高，胃蛋白酶處理組和中性蛋白酶處理的IC50分別為29.6mg/ml和3
7、5.2mg/mlo圖1不同濃度多糖還原力測圖2不同濃度多糖輕自由基清除率測測2.6多糖清除超氧自由基能力測定超氧自由基是生物體中一類重要的自由基，能損傷生命大分子而導致各種疾病。因此，測定多糖清除超氧自由基能力具有重要的意義。如圖3所示，四種方法提取的多糖超氧自由基能力清除率隨著多糖濃度的增加而增加，增加一定程度后清除率放緩趨平。其中，中性蛋白酶處理組與熱水浸提組對超氧自由基清除率相近,IC50分別為15.1mg/ml和16.5mg/mlo堿性蛋白酶處理組
