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《miR-206對三陰性乳腺癌細(xì)胞的增殖抑制作用及初步機(jī)制研究-論文.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、·1062·臨床腫瘤學(xué)雜志2013年12月第18卷第12期ChineseClinicalOncology，Dec．2013，Vo1．18，No．12miR．206對三陰性乳腺癌細(xì)胞的增殖抑制作用及初步機(jī)制研究210000南京南京醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院腫瘤科石永國，卞衛(wèi)和，何燁，丁潔，周晶，王科明，【摘要】目的探討miR-206對三陰性乳腺癌細(xì)胞MDA．MB-231增殖的影響及其作用機(jī)制。方法轉(zhuǎn)染miR-206mimic和miR．NC至乳腺癌細(xì)胞株MDA．MB-231中，應(yīng)用實時熒光定量PCR(qRT．PCR)技術(shù)檢測m
2、iR-206相對表達(dá)水平；應(yīng)用MTI'法、克隆形成實驗檢測miR-206對MDA．MB-231細(xì)胞增殖能力的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測miR-206對細(xì)胞周期的影響；Westernblotting進(jìn)一步驗證miR-206對周期相關(guān)蛋白CyclinD2的影響。結(jié)果qRT—PCR檢測結(jié)果顯示，miR一206mimic轉(zhuǎn)染至MDA．MB-231乳腺癌細(xì)胞48h后miR-206的相對表達(dá)水平為10．2±1．5。MTr法檢測結(jié)果顯示，miR-206mimic轉(zhuǎn)染至MDA．MB-231乳腺癌細(xì)胞6、24、48、72、96h后的增殖抑制
3、率分別為(04-0．O1)％、(0．124-0．03)％、(0．214-0．08)％、(0．284-0．11)％和(0．394-0．16)％；克隆形成實驗結(jié)果顯示，miR-206mimic和miR—NC轉(zhuǎn)染至MDA—MB-231乳腺癌細(xì)胞2周后的克隆數(shù)目分別為1064-35和843±143，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．01)。流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，miR-206mimic轉(zhuǎn)染至MDA．MB-231乳腺癌細(xì)胞48h后，明顯地阻滯細(xì)胞周期于G1期；Westernblotting檢測顯示miR-206表達(dá)下調(diào)了細(xì)胞周期蛋
4、白CyclinD2的表達(dá)。結(jié)論miR-206明顯抑制了三陰性乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231的增殖，其機(jī)制可能與下調(diào)細(xì)胞周期蛋白CyclinD2的表達(dá)有關(guān)，這將成為乳腺癌臨床治療一個新的靶點(diǎn)。【關(guān)鍵詞】miR-206；細(xì)胞周期蛋白D2；乳腺癌中圖分類號：R737．9文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1009—0460(2013)12—1062—04TheinhibitoryefectsofmiR-206ontripienegativebreastcancercellproliferationanditsmechanismSH／
5、Yongguo，BIAN耽e，HEYe，DINGJie，ZHOUJing，WANGKeming．DepartmentofOncology，theSecondAffiliatedHospitalofNanfingMedicalUniversity，Nanjing210000，ChinaCorrespondingauthor：WANGKeming，E-mail：wkmys@sohu．corn【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheefectofmiR-206ontheproliferatio
6、noftriplenegativebreastcancercellMDA—MB一231invitroanditsactionmechanism．MethodsMiR-206MiR．206mimicandmiR．NCweretransfectedintoMDA．MB-231breastcancercel1．TheexpressionlevelofmiR-206wasdetectedbyrealtimequantitativePCR(qRT-PCR)．MTYandcolonyformationas—sayswereuse
7、dtodetecttheefectofmiR-206onbreastcancercellproliferation．Flowcyt0metrywasusedtodetecttheefectoncellcycle．WesternblottingwasusedtoanalyzetheexpressionofcyclinD2inbreastcancercellaftertransfectedwithmiR-206．ResultsTheresultsofqRT-PCRshowedthattherelativeexpressi
8、onofmiR-206was10．24-1．5whenMiR-206mimicwastransfeetedintoMDA-MB-231breastc~qeercellfor48h．TheinhibitionrateofMDA—MB-231breastco／leercellwhichwastransfectedbymiR-206mimicfor6
