calphostin c對乳腺癌細胞增殖的抑制作用及相關機制

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1、CalphostinC對乳腺癌細胞增殖的抑制作用及相關機制：千新來，崔靜，任峰，趙杰，冶亞平，賀國洋，李新強，朱慧芳，韓芳毅，楊慧林，王霞，原志慶【摘要】　　目的研究CalphostinC對乳腺癌細胞MDAMB435S增殖的影響及初步機制。方法通過觀察CalphostinC處理MDAMB435S細胞前后細胞的生長速度、倍增時間、克隆形成率和細胞周期分布等變化，探討CalphostinC對MDAMB435S細胞增殖的影響；通過DAMB435S細胞增殖的初步機制。結果與MDAMB435S親本細胞(對照組)相比，CalphostinC處理的

2、MDAMB435S細胞(實驗組)生長速度明顯減慢，倍增時間明顯延長(P<0.01)，并且呈現(xiàn)濃度和時間依賴性；對照組和實驗組細胞克隆形成率分別為(82.33±6.81)%和(22.00±1.73)%，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；實驗組細胞周期出現(xiàn)明顯的G1期阻滯(P<0.01)。DAMB435S的增殖，該作用可能與其抑制PKCα活性、上調p21表達和下調CyclinE表達有關?！娟P鍵詞】鈣磷酸蛋白C；蛋白激酶C；乳腺癌；增殖　　China)ABSTRACT:ObjectiveToexploretheeffectsofCal

3、phostinContheproliferationofbreastcarcinomacells(MDAMB435S)anditspreliminarymechanism.MethodsTheeffectsofCalphostinContheproliferationofMDAMB435Scellse,cloneformingefficiency,anddistributionofcellcycleofMDAMB435ScellsbeforeandafterCalphostinCtreatment.Furthermore,themechan

4、isminvolvedmunocytochemistryandRTPCRassay.Resultsparedarkedlyandthedoublingtimeentalgroup),andthechangespresentedconcentrationandtimedependencepatterns.Furthermore,thecloneformingefficiencyincontrolgroupandexperimentalgroupentalgroupcells,thecellcyclearrestedinG1phase(P<0.

5、01).TheresultsfromDAMB435ScellstreatedarkedlytheproliferationofMDAMB435Scells,aybecorrelatedtotheabilitiesofinhibitingPKCαactivity,upregulatingtheexpressionofp21anddoa;proliferation　　腫瘤細胞過度增生與有絲分裂信號途徑相關基因過度表達密切相關，而蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)的過度激活在后者中起重要作用[1]，提示PKC的過度激活可能與腫瘤的發(fā)生

6、發(fā)展有關。越來越多的證據顯示,多種腫瘤(如乳腺癌、惡性神經膠質瘤等)組織中PKC的表達和活性都遠高于相應的正常組織[2]。因此，PKC是一個潛在的有價值的抗腫瘤治療靶點[1]。PKC特異抑制劑鈣磷酸蛋白(Calphostin)是一類菌類分支孢子菌屬分子孢子提取物，以CalphostinC最具代表性[34]。乳腺癌的發(fā)生率在世界范圍內仍呈上升趨勢，我國乳腺癌發(fā)生率增加速度(3%～5%)明顯高于世界平均水平(1.5%)[5]。鑒于以上研究及國內、外尚未見CalphostinC對乳腺癌作用的相關報道，本研究擬以乳腺癌細胞MDAMB435S為研究對象，探討

7、CalphostinC對乳腺癌細胞增殖的影響和初步機制?！　?材料與方法　　1.1材料　　1.1.1主要試劑　　CalphostinC為美國Calbiochem公司產品；胎牛血清(fetalbovineserum,FBS)為杭州四季青公司產品；逆轉錄聚合酶鏈反應(reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RTPCR)試劑盒、TaqDNA聚合酶和dNTPs等為美國Promega公司產品；Trizol試劑、蛋白分子量標準、100bpDNAMarkers和DMEM/F12培養(yǎng)基等為美國Invitrogen公

8、司產品；二甲基亞砜(dimethylsulfoxide,DMSO)、丙烯酰胺、甲