寒涼藥對(duì)熱證大鼠肝線粒體蛋白質(zhì)組的影響-論文.pdf

《寒涼藥對(duì)熱證大鼠肝線粒體蛋白質(zhì)組的影響-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。

1、第38卷第23期2013年12月、黼中China圈JournI中ofCh。n藥esea雜teria志edicaVoD1．ec3e8m，bIsesru，e20213寒涼藥對(duì)熱證大鼠肝線粒體蛋白質(zhì)組的影響李毅，盧德趙，唐利華，沃興德，楊貞(浙江中醫(yī)藥大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，浙江杭州310053)【摘要]自20世紀(jì)60年代起，現(xiàn)代科學(xué)開始對(duì)熱證的本質(zhì)進(jìn)行研究，但有關(guān)熱證的病理機(jī)制和寒涼藥物的作用機(jī)制等尚未深入系統(tǒng)研究。該研究以具有代表性的熱性中藥喂飼動(dòng)物造成熱證模型，后用寒涼藥進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性治療，擬采用雙向電泳及質(zhì)譜分析技術(shù)對(duì)熱證模型大鼠及寒涼藥治

2、療后的大鼠肝線粒體蛋白組進(jìn)行比較，從中發(fā)現(xiàn)熱證及寒涼藥治療后的特異性相關(guān)蛋白質(zhì)。[關(guān)鍵詞]寒涼藥；熱證；線粒體；蛋白質(zhì)組寒熱是用以概括機(jī)體陰陽盛衰的兩類證候。祖至1g·mL一。雙向電泳相關(guān)試劑均購自Bio—Rad國醫(yī)學(xué)認(rèn)為“陽勝則外熱”、“陰虛則內(nèi)熱”，在臨床公司，酶解試劑均購自Sigma公司。上熱證主要表現(xiàn)為：惡熱喜冷，煩躁不安，口眼干燥，1．2動(dòng)物分組及造模清潔級(jí)SD雄性大鼠18面紅目赤，咳痰黃稠，舌紅脈數(shù)等，綜合起來以基礎(chǔ)只，體重180～220g，購自浙江大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，代謝率偏高，機(jī)體能量過剩為特征。熱證的形成機(jī)隨機(jī)分為正

3、常對(duì)照組、熱證模型組和藥物治療組。理有很多，中醫(yī)古籍《黃帝內(nèi)經(jīng)》等對(duì)其病因均有介參照徐志偉等的實(shí)驗(yàn)方法，正常對(duì)照組動(dòng)物正常紹，自20世紀(jì)60年代起，現(xiàn)代科學(xué)開始對(duì)熱證的本飲食，每鼠每日灌喂生理鹽水4mL，共4周；熱證模質(zhì)進(jìn)行研究，然而目前有關(guān)熱證的病理機(jī)制和寒涼型組每鼠每日灌以溫?zé)崴?mL(約含4g生藥)，造藥物的作用機(jī)制等，尚未深入系統(tǒng)研究¨J。模2周后繼續(xù)每鼠每日4mL生理鹽水灌胃2周；藥肝臟是人體重要的代謝器官，肝細(xì)胞中的線粒物治療組為造模2周后每鼠每日繼續(xù)灌以寒涼藥4體則是重要的細(xì)胞器，是細(xì)胞呼吸鏈和氧化磷酸化mL(約含4g

4、生藥)2周。的中心，在能量代謝中發(fā)揮著重要的作用。本研究1．3常規(guī)生理指標(biāo)檢測4周后開始分別測定3以具有代表性的熱性中藥喂飼動(dòng)物造成熱證模型，組大鼠體重增長值，24h尿量，飲水量和飲食量，并后用寒涼藥進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性治療，擬采用雙向電泳及質(zhì)測定肛溫。譜分析技術(shù)對(duì)熱證模型大鼠及寒涼藥治療后的大鼠1．4血清激素含量測定4周后采用眼眶后靜脈肝線粒體蛋白組進(jìn)行比較，從中發(fā)現(xiàn)熱證及寒涼藥叢取血法。每組每只大鼠采血3～4mL，分離出血治療后的特異性相關(guān)蛋白質(zhì)，在線粒體蛋白質(zhì)組水清，運(yùn)用雙抗體夾心化學(xué)發(fā)光兩步法檢測血清113，平闡述中醫(yī)熱證能量代謝障礙

5、的內(nèi)在物質(zhì)基礎(chǔ)及寒T4含量；應(yīng)用固相競爭化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法測定涼藥的作用機(jī)制，進(jìn)而指導(dǎo)中醫(yī)的臨床診斷與治療。睪酮含量。1材料與方法1．5大鼠線粒體蛋白質(zhì)提取及差異蛋白質(zhì)分析41．1藥材與試劑所有中藥均采購于杭州方回春周后處死大鼠，取肝臟勻漿，按文獻(xiàn)方法提取肝臟線堂藥店。溫?zé)崴幰愿阶?、干姜、肉桂?：1：1比例，粒體蛋白質(zhì)，進(jìn)行雙向電泳，每組重復(fù)3次。經(jīng)常規(guī)煎2次，合并濃縮至1g·mL～；寒涼藥以黃UMAXImageScanner凝膠掃描儀掃描圖譜，運(yùn)用Im—芩、黃連、黃柏按1：1：1比例，常規(guī)煎2次，合并濃縮ageMaster軟件

6、分別進(jìn)行兩兩比較。分別取2組問相互匹配且具有明顯表達(dá)差異(Variation>2．0，P<[收稿日期]2013-06-180．05)的蛋白質(zhì)進(jìn)行酶解及質(zhì)譜鑒定。[基金項(xiàng)目]浙江省中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)項(xiàng)目(2006Z002)；浙江省中2結(jié)果醫(yī)藥管理局項(xiàng)目(2007CB139)[通信作者]楊貞，Tel：(0571)86613626，E-mail：msyangzhen@2．1常規(guī)生理指標(biāo)觀察熱證大鼠體消瘦，煩躁、163．corn多動(dòng)，口渴喜飲，厭食，皮毛干燥無光澤，豎毛易掉·4144·第38卷第23期中圈中藥雜右、VoD1．38，Issue2

7、32013年12月ecember，2013落，灌藥時(shí)掙扎較明顯，尿液少且顏色明顯紅赤，大明顯改善，見表1。便干硬。經(jīng)寒涼藥治療后大鼠各項(xiàng)癥狀、體征均有與對(duì)照組大鼠比較，模型組大鼠飲食及體重表1各組大鼠代謝指標(biāo)的測定(面±s，n=6)Table1Determinationresultsofmetabolicindexesinrats(面±s，n=6)注：與對(duì)照組比較’P<0．05，P<0．01；與模型組比較P

8、水量顯著下降，其余指標(biāo)未明顯改變?！?．2激素水平變化甲狀腺激素在體內(nèi)的主要作用是促進(jìn)組織氧化及產(chǎn)熱，使機(jī)體能量代謝維持一A．對(duì)照組；B．模型組；C．寒藥治療組。定水平，從而穩(wěn)定體溫j。中醫(yī)認(rèn)為：陽盛則熱，與圖1大鼠肝線粒體蛋白質(zhì)的雙