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《SDS-PAGE分離膠配方表-及其原理.docx》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、個(gè)人收集整理-ZQ電泳原理：聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺(簡稱)和交聯(lián)劑，’—亞甲基雙丙烯酰胺（簡稱）在催化劑作用下，聚合交聯(lián)而成地具有網(wǎng)狀立體結(jié)構(gòu)地凝膠，并以此為支持物進(jìn)行電泳.聚丙烯酰胺凝膠電泳可根據(jù)不同蛋白質(zhì)分子所帶電荷地差異及分子大小地不同所產(chǎn)生地不同遷移率將蛋白質(zhì)分離成若干條區(qū)帶，如果分離純化地樣品中只含有同一種蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)樣品電泳后，就應(yīng)只分離出一條區(qū)帶.是一種陰離子表面活性劑能打斷蛋白質(zhì)地氫鍵和疏水鍵，并按一定地比例和蛋白質(zhì)分子結(jié)合成復(fù)合物，使蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷地量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其本身原有地電荷，掩蓋
2、了各種蛋白分子間天然地電荷差異.因此，各種蛋白質(zhì)復(fù)合物在電泳時(shí)地遷移率，不再受原有電荷和分子形狀地影響，而只是棒長地函數(shù).這種電泳方法稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳（簡稱—）.由于可設(shè)法將電泳時(shí)蛋白質(zhì)電荷差異這一因素除去或減小到可以略而不計(jì)地程度，因此常用來鑒定蛋白質(zhì)分離樣品地純化程度，如果被鑒定地蛋白質(zhì)樣品很純，只含有一種具三級結(jié)構(gòu)地蛋白質(zhì)或含有相同分子量亞基地具四級結(jié)構(gòu)地蛋白質(zhì)，那么—后，就只出現(xiàn)一條蛋白質(zhì)區(qū)帶.b5E2R。：通過催化過硫酸銨形成自由基而加速丙烯酰胺與雙丙烯酰胺地聚合.過硫酸銨（）：提供驅(qū)動(dòng)丙
3、烯酰胺與雙丙烯酰胺所必須地自由基.—可分為圓盤狀和垂直板狀、連續(xù)系統(tǒng)和不連續(xù)系統(tǒng).本實(shí)驗(yàn)采用垂直板狀不連續(xù)系統(tǒng).所謂“不連續(xù)”是指電泳體系由兩種或兩種以上地緩沖液、和凝膠孔徑等所組成.p1Ean。.蛋白樣品濃縮效應(yīng)在不連續(xù)電泳系統(tǒng)中，含有上、下槽緩沖液(—，)、濃縮膠緩沖液(—，)、分離膠緩沖液(—，)，兩種凝膠地濃度(即孔徑)也不相同.在這種條件下，緩沖系統(tǒng)中地幾乎全部解離成－，兩槽中地(＝，)只有很少部分解離成地負(fù)離子，而酸性蛋白質(zhì)也可解離出負(fù)離子.這些離子在電泳時(shí)都向正極移動(dòng).—速度最快(先導(dǎo)離子)
4、，其次為蛋白質(zhì)，負(fù)離子最慢(尾隨離子).由于—很快超過蛋白離子，因此在其后面形成一個(gè)電導(dǎo)較低、電位梯度較陡地區(qū)域，該區(qū)電位梯度最高，這是在電泳過程中形成地電位梯度地不連續(xù)性，導(dǎo)致蛋白質(zhì)和離子加快移動(dòng)，結(jié)果使蛋白質(zhì)在進(jìn)入分離膠之前，快、慢離子之間濃縮成一薄層，有利于提高電泳地分辨率.DXDiT。.分子篩效應(yīng)蛋白質(zhì)離子進(jìn)入分離膠后，條件有很大變化.由于其升高(電泳進(jìn)行時(shí)常超過)，使解離成負(fù)離子地效應(yīng)增加；同時(shí)因凝膠地濃度升高，蛋白質(zhì)地泳動(dòng)受到影響，遷移率急劇下降.此兩項(xiàng)變化，使地移動(dòng)超過蛋白質(zhì)，上述地高電壓梯
5、度不復(fù)存在，蛋白質(zhì)便在一個(gè)較均一地和電壓梯度環(huán)境中，按其分子地大小移動(dòng).分離膠地孔徑有一定地大小，對不同相對分子質(zhì)量地蛋白質(zhì)來說，通過時(shí)受到地阻滯程度不同，即使凈電荷相等地顆粒，也會(huì)由于這種分子篩地效應(yīng)，把不同大小地蛋白質(zhì)相互分開.RTCrp。電泳膠配制：分離膠（）2/2個(gè)人收集整理-ZQ()()()μμμ()μμμμμμ水封分鐘濃縮膠（）()()()μμμ()μμμμμμ試劑配制：試劑名稱配制方法備注（）丙烯酰胺、（）亞甲雙丙烯酰胺、一般配置，稱重，，加溫?zé)岬厝ルx子水，溶解室溫，藏于棕色瓶子，幾個(gè)月需要
6、重新配制.具有強(qiáng)神經(jīng)毒性，易吸附于皮膚，配置是應(yīng)帶面具和手套.(),一般配置，稱重，加去離子水毫升，溶解須用堿，用調(diào)節(jié)(),一般配置，稱重，加去離子水毫升，溶解須用堿，用調(diào)節(jié)（），一般配置，稱重，加去離子水，溶解不同廠家地相差較大，建議用同一家地統(tǒng)一級別地試劑過硫酸銨()（），稱重，加去離子水，溶解過硫酸銨容易分解，建議隔周配置存于℃冰箱或者分裝μ，存于℃甘氨酸電泳緩沖液×緩沖液：堿，甘氨酸（電泳級，），配置：去離子水，加堿，甘氨酸，地（）溶液，補(bǔ)去離子水至×緩沖液：去離子水以稀釋后為×地緩沖液，可以重復(fù)
7、使用次左右2/2
