總酚含量測定.doc

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1、一、?測定方法概述?1.依據(jù)酚類物質(zhì)可以被高錳酸鉀氧化的性質(zhì),高錳酸鉀滴定法?2.酚類化合物在堿性條件下可以與4-氨基安替比林反應生成紅色染料,比色?3.酚羥基可與酒石酸鐵中的鐵離子反應生成藍色絡合物比色?4.酚類物質(zhì)還原福林試劑生成藍紫色物質(zhì),比色?二、高錳酸鉀滴定法測多酚?此方法多應用在茶葉上?原理:酚類物質(zhì)可以被高錳酸鉀氧化,煙葉中還有一些酚類衍生物和非酚類物質(zhì)也可以被高錳酸鉀氧化,會使測定結(jié)果偏高。因此滴定須分兩步進行:第一步滴定待測液中總還原性物質(zhì),第二步用明膠鹽溶液將酚類物質(zhì)沉淀后,測定待測液中其它還原性物質(zhì)含量,二者之差就是樣品中多酚含量。但是綠原酸不能被

2、沉淀,因此,此法不易用來測定煙草多酚。0.1%靛紅作指示劑。?酚類提取:采用沸水浴方法提取。?三、氨基安替比林比色法?此方法用來測樣品中揮發(fā)性酚類化合物,常常應用在食品,水等揮發(fā)酚的測定。靈敏度最高高。?原理:酚類化合物在堿性溶液中,當有氧化劑鐵氰化鉀存在時,可以與4-氨基安替比林生成一種紅色染料,用分液漏斗將紅色染料萃取到氯仿層,在460nm處比色。用苯酚作標準曲線,計算出樣品中揮發(fā)性酚類物質(zhì)含量。?1此方法酚的提取步驟比較麻煩:?先在2.5mol/L硫酸溶液中加熱回流1小時,將樣品中中揮發(fā)酚提取出來。通入水蒸氣把酚蒸餾出來,收集并定容。?2苯酚腐蝕性強,為結(jié)晶體,不

3、好秤取。?3蒸餾裝置不能漏氣,且所用的橡皮類物質(zhì)需要事前用堿水浸泡,并水煮10min。?四、酒石酸比色法?原理:酚類物質(zhì)的羥基與酒石酸鐵中的鐵離子生成藍色絡合物,根據(jù)絡合物溶液顏色深淺,在540nm處比色,可測出煙葉中酚類物質(zhì)含量。以兒茶酚或沒食子酸乙酯作標準溶液??梢杂脕頊y定煙草中的多酚。?此方法酚的提取與福林法測多酚提取步驟一樣。?五、福林法測煙葉多酚/總酚?1.原理;?在堿性條件下利用多酚的還原性,多酚可以將磷鎢鉬酸還原成藍色,藍色深淺與多酚含量城正相關,可以用分光廣度計進行測定。?2.試劑和儀器:?試劑:兒茶酚或沒食子酸乙酯,鉬酸鈉,磷鎢酸,Na2CO3?儀器:

4、水浴鍋,721分光光度計,試管,三角瓶,漏斗,濾紙,移液管。?3.?操作步驟:?3.1待測液制備:50mg煙樣于150mL三角瓶中,加入80℃蒸餾水50mL,80℃以上溫度水浴提取30min(期間需要搖晃幾次),取出冷卻,過慮并定容至100mL容量瓶中。此為待測液。??3.2??測定:2支干試管,各加入5ml待測液,一支加福林試劑5ml,一支加5ml代替福林試劑,搖勻3分鐘后,各加入5ml10%Na2CO3,振蕩,室溫下顯色1h,以不加福林試劑的試管管為對照,700nm比色。?3.3?繪制標準曲線:?兒茶酚母液:1mg/ml,再依次配制成100ml中含有兒茶酚0.5,1

5、.0,1.5,2.0mg的4種不同濃度的標液。?取5支試管,分別加入上述標液5ml,對照加蒸餾水5ml,然后各加福林試劑5ml,搖勻3分鐘后,各加入5ml?10%Na2CO3,振蕩,室溫下顯色1h,700nm比色。?7總酚含量測定??參考韓富根的方法,略有改動,?7.1樣品處理:取鮮葉0.5g,加3ml?95%乙醇研磨成勻漿狀,?再加5ml?95%乙醇過濾,用95%乙醇定容至25ml。以兒茶酚作標準曲線。?7.2樣品測定:取2?ml待測液于10ml離心管中,再加入2?ml福林試劑,搖勻,3min后加入10%碳酸鈉2?ml振蕩。靜置1?h后700?nm處比色測定,以2ml

6、蒸餾水代替待測液作為空白。根據(jù)標準曲線計算總酚含量?!酒叻N與小麥近緣的野生植物對禾谷縊管蚜抗性的生化機制】?7.3試劑配制?①福林試劑:將鎢酸鈉25g、磷鉬酸5g,磷酸12.5ml同蒸餾水188ml一道回流煮沸2h,冷卻后用蒸餾水定容至1L。?②10%碳酸鈉溶液:用無水碳酸鈉配制,冬季氣溫低時會析出碳酸鈉結(jié)晶,可在溫水浴上加熱溶解后使用。?③酚標準溶液:先配制成100ml含兒茶酚60mg的溶液,再依次配制成100ml中含兒茶酚不同濃度0.5?1.0?1.5?2.0mg?(臨用時再配)。10mg/100ml為母液?標準系列的配置?總體積ml666666福林試劑ml2222

7、2210%Na2CO3ml?222222鄰苯二酚ml00.10.20.30.40.5蒸餾水ml?21.91.81.71.61.5濃度ug/?ml01020304050

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