厚薄血膜涂片法.doc

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1、厚薄血膜涂片法：常用于絲蟲病，瘧原蟲的檢測操作方法：（1）采血：①采血時間在普查時，一般無法考慮采血時間。在臨床上，對現(xiàn)癥病人一般可隨時采血，但為了提高檢出率，就應當考慮采血的適當時間。對典型發(fā)作的間日瘧及三日瘧患者，應選擇發(fā)作后數(shù)小時至10余小時采血為好。此時瘧原蟲發(fā)育至環(huán)狀乃至大滋養(yǎng)體，蟲體大，瘧色素已形成，受染紅細胞也出現(xiàn)變化，有利于瘧原蟲的檢出，惡性瘧原蟲原蟲大滋養(yǎng)體和裂殖體是在皮下、脂肪和內臟微血管中發(fā)育的，通常在外周血液中不易查到。配子體在環(huán)狀體出現(xiàn)1周后方能見于外周血液，故在發(fā)作時采血。②

2、采血部位從患者耳垂或指尖（以左手無名指為宜）取血，嬰兒通常從大拇趾第二趾骨腹面針刺采血。③采血方法用75%乙醇棉球消毒取血部位皮膚，待干后用左手拇指和食指捏住采血部位，右手持針迅速刺入皮膚，待血液流出或輕輕擠出血滴，供制作涂片用，采血完畢用干棉球輕壓傷口止血。（2）制片：①薄血膜制作取1滴血于1張潔凈的載玻片上，選1張邊緣平整、光滑的載玻片作推片，用左手拇指和中指夾持其兩端，將推片的邊緣中點與血滴接觸，并與載玻片呈30°~45°夾角，待血滴沿推片邊緣向兩側展開后，立即由右向左迅速推成薄血膜。理想的薄血膜

3、要求紅細胞均勻地鋪成一層，無裂痕，其末端凸出呈舌尖形。注意：推成時用力和速度要均勻，不能中途停頓或重復推片，以免造成血膜斷裂或厚薄不勻。如取血量多，夾角宜?。喝⊙啃?，則夾角可大些。②厚血膜的制作用推片的一角接觸刺血點上的血滴，取血2滴，置載玻片上，并從里向外作旋轉涂片，使成直徑為0.8cm大小的圓形血膜，厚薄要均勻，然后平置桌上，待自然干燥。③厚薄血膜同片制作用目測法將載玻片從右向左等分成6格，厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前緣至第6格中部，第1、2格可用于貼標簽，制作厚、薄血膜方法同上。（3

4、）染色：①瑞氏染色法（Wrightstaining）厚血膜需先溶血，溶血方法為：滴加數(shù)滴蒸餾水于厚血膜上，使紅細胞溶解，待血膜呈灰白色時，將水倒去，晾干。取制作好的血片，在血膜兩端用玻璃蠟筆各劃一豎線，滴加瑞氏染液數(shù)滴，使其布滿血膜，染液中含甲醇，約0.5-1分鐘將血膜固定，然后加等量緩沖液或蒸餾水，輕搖載玻片，使之與染液混勻，很快液面出現(xiàn)燦銅色膜，約經3~5分鐘染色后，用緩沖液、蒸餾水或自來水沖洗。注意：切勿傾去染液再用水沖洗，以免血膜上沉著染料顆粒，影響鏡檢。如厚、薄血膜涂在同一張載玻片上，先在厚、

5、薄膜中間及兩側用蠟筆各劃一條豎線，滴蒸餾水于厚血膜上，使之溶血，待血膜干后，與薄血膜一起染色。①吉氏染色法（Giemsa’staining）取吉氏染液原液，用pH7.0~7.2的磷酸緩沖液稀釋10~20倍。厚血膜不需固定，薄血膜先用甲醇固定（如大批染片，可置入染色缸），染20~30分子，沖洗，晾干后鏡檢稀釋的染液，宜用時現(xiàn)配，否則易產生沉淀，影響染色效果，大批染色時，應根據(jù)染色時的條件，如不同病人的血片，染色時的室溫、染液稀釋程度、沖洗水的pH值等情況的不同，先試染少量血片，摸索出染色效果最佳的時間和條

6、件，再大批染色。此外，染色時間應隨染液稀釋情況作適當?shù)恼{整，染色濃度高，染色時間可短些，反之則長。吉氏染液配制：吉氏染劑粉1g，甘油50ml，甲醇50ml。將染劑粉置研缽中，加少量甘油，充分研磨，再邊加甘油邊研磨，直至甘油用完。然后加少量甲醇，研磨后倒入棕色瓶中，剩余的甲醇分幾次沖洗研缽中的染液，全部倒入瓶內，塞緊瓶塞充分搖勻，置65℃溫箱內24小時或室溫下1周后過濾，即成原液。瑞氏染色法操作簡便、快速，臨床上經常使用，因甲醇易于蒸發(fā)，如掌握不當可能在血膜上產生沉淀，妨礙觀察。同時染色結果也不大一致，在

7、較熱的環(huán)境中較易褪色，保存時間較短。吉氏染色法染色效果好，對厚血膜尤佳。經稀釋后的染液對厚血膜兼有溶血和染色的雙重作用。染色后，瘧原蟲細胞核和細胞質紅藍分明，很少出現(xiàn)沉淀，不易褪色。適用染大批血片標本，供教學使用，但染色需時較長。（4）鏡檢在檢查薄血膜過程中，有時遇見與瘧原蟲形態(tài)類似的物體，應注意區(qū)別排除。如單個血小板附于紅細胞上，易誤認為環(huán)狀體或成長中的滋養(yǎng)體。成堆的血小板誤認為成熟的裂殖體。血小板的形狀多樣，或呈圓形，卵圓形，有時呈不規(guī)則多角形，其長徑約為紅細胞的1/3、1/4。血小板中央部常呈紫紅

8、色顆粒狀結構，周邊部分著色淺，但不如瘧原蟲紫紅色胞核與淺藍色胞質分得清楚。此外，還有染色液沉淀顆粒以及偶有細菌。霉菌。塵粒、白細胞碎片重疊于紅細胞上，很像環(huán)狀體和成長中的滋養(yǎng)體。但這些物質大多呈一種顏色，如細調顯微鏡焦距，可以看出它們與紅細胞不在同一水平面上。厚血膜中瘧原蟲比較集中（一個視野可見到的細胞數(shù)約相當于20個薄血膜視野），但厚血膜經溶血后，紅細胞輪廓已消失，原蟲皺縮變形，蟲體比薄血膜中的略小，有的原蟲胞質著色很深，胞核模糊不清，初