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《雞Mx蛋白單克隆抗體的制備及鑒定.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第35卷第7期中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)Vo1．35．NO．72013年7月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJu1．2013doi：10．3969~．issn．1008-0589．2013．07．19雞Mx蛋白單克隆抗體的制備及鑒定胡衛(wèi)杰，王偉，孫建華，鄧瑞坡，張雅春，尹海暢，盂慶文‘(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱150001)摘要：Mx蛋白為GTP酶動態(tài)蛋白家族成員，已被證明具有抗禽流感病毒、Thogoto病毒和水泡性口膜炎病毒等的作用。為制備雞Mx蛋白的單克隆抗體(MAb)，本研究以原核表
2、達(dá)并純化的雞Mx蛋白為免疫原，免疫BALB／c小鼠，分離脾細(xì)胞與SP2／0細(xì)胞融合，采用間接ELISA方法篩選陽性克隆，經(jīng)3次細(xì)胞克隆純化后獲得4株穩(wěn)定分泌抗雞Mx蛋白抗體的雜交瘤細(xì)胞株。間接ELISA測定4株MAb純化后腹水的效價介于l：3．2x104～1：2．5×l0之間。Westernblot結(jié)果證實(shí)4株MAb均具有良好的反應(yīng)性；間接免疫熒光試驗(yàn)表明其中一株MAb與真核表達(dá)的雞Mx蛋白發(fā)生反應(yīng)。本研究為雞Nix蛋白功能及表達(dá)雞Mx蛋白的轉(zhuǎn)基因動物等研究奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：雞；Mx蛋白；單克隆抗體中圖分類號：$852．4文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1008．0589(2013)0
3、7．0589．03PreparationandidentificationofmonoclonalantibodiesagainstchickenMxproteinHUWei~ie，WANGWei，SUNJian-hua，DENGRui—po，ZHANGYa—chun，YINHal—chang，MENGQing—wen(StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，Chin
4、a)Abstract：MxproteinisamemberoflargeGTPasesfamilyandproventohaveantivirusactivitiestoavaininfluenzavirus(ArV)，ThogotovirusandVesicularstomatitisvirus．Topreparethemonoclonalantibodies(MAbs)againstchickenMxprotein，thesplenocytesofBALB／cmiceimmunizedwithpurifiedchickenMxproteinexpressedinE．co／／"
5、werefusedwithSP2／0cellsand4hybridomassecretingMAbswerescannedbyELISA．TitersoftheMAbsinasciteswererangedfrom1：3．2xl0to1：2．5xlOassayedbyELISA．WesternblotanalysisshowedthatalltheMAbsreactedpositivelywithchickenMxproteinexpressedbyE．co／i，butonly1ofwhichreactedwithMxproteinexpressedinMDCKcellstran
6、sfectedwithpcDNA3．1-Mxdetectedbyindirectimmunofluorescenceassay．TheseMAbswouldfacilitatethefurtherstudiesonthefunctionofthetransgenicanimalsexpressingchickenMxprotein．Keywords：chicken；Mxprotein；monoclonalantibodyMx蛋白屬于GTP酶動態(tài)蛋白家族成員，由I的Mx蛋白具有不同的抗病毒特性。小鼠Mxl蛋白型干擾素(Interferon，IFN)誘導(dǎo)產(chǎn)生，研究表明不同已證明能夠抑
7、制禽流感病毒(Avaininfluenzavirus，*Correspondingauthor收稿日期：2012．06．24基金項(xiàng)目：國家自然基金項(xiàng)目(30771615)；農(nóng)業(yè)部科技重大專項(xiàng)(2009ZX08006．oom)；農(nóng)業(yè)部科技重大專項(xiàng)(2009ZX08010—022B)作者簡介：胡衛(wèi)杰(1985．)，男，IN)iI眉山人，碩士研究生，主要從事轉(zhuǎn)基因動物研究．通信作者：E．mail：mqw@hvri．a(chǎn)c．cn
